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公司產品
定制siRNA
公司為客戶提供不同長度、不同形式，由客戶自行設計的RNA oligo。（堿基數小于50 base）
| 目錄號 | 產品名稱 | 規格 | 純化方式 | 價格 | 交貨期限 |
| A09001 | 客戶定制RNA oligo | 2 OD | HPLC | 詢價 | 問詢 |
| A09002 | 客戶定制RNA oligo | 3 OD | HPLC | 詢價 | 問詢 |
| A09003 | 客戶定制RNA oligo | 4 OD | HPLC | 詢價 | 問詢 |
| A09004 | 客戶定制RNA oligo | 5 OD | HPLC | 詢價 | 問詢 |
| A09005 | 客戶定制RNA oligo | 6 OD | HPLC | 詢價 | 問詢 |
| A09006 | 客戶定制RNA oligo | 7 OD | HPLC | 詢價 | 問詢 |
| A09007 | 客戶定制RNA oligo | 8 OD | HPLC | 詢價 | 問詢 |
| A09008 | 客戶定制RNA oligo | 9 OD | HPLC | 詢價 | 問詢 |
| A09009 | 客戶定制RNA oligo | 10 OD | HPLC | 詢價 | 問詢 |
| A09010 | 客戶定制RNA oligo | 25 OD | HPLC | 詢價 | 問詢 |
| A09011 | 客戶定制RNA oligo | 50 OD | HPLC | 詢價 | 問詢 |
| A09012 | 客戶定制RNA oligo | 100 OD | HPLC | 詢價 | 問詢 |
| A09013 | 客戶定制RNA oligo | 250 OD | HPLC | 詢價 | 問詢 |
| 目錄號 | 產品名稱 | 規格 | 純化方式 | 價格 | 交貨期限 |
| A04001 | 5'-生物素修飾siRNA (5' Biotin) | 2 OD | HPLC | ￥650 | 8個工作日 |
| A04002 | 5'-生物素修飾siRNA (5' Biotin) | 3 OD | HPLC | ￥730 | 8個工作日 |
| A04003 | 5'-生物素修飾siRNA (5' Biotin) | 4 OD | HPLC | ￥800 | 8個工作日 |
| A04004 | 5'-生物素修飾siRNA (5' Biotin) | 5 OD | HPLC | ￥900 | 8個工作日 |
| A04005 | 5'-生物素修飾siRNA (5' Biotin) | 6 OD | HPLC | ￥1,000 | 8個工作日 |
| A04006 | 5'-生物素修飾siRNA (5' Biotin) | 7 OD | HPLC | ￥1,200 | 8個工作日 |
| A04007 | 5'-生物素修飾siRNA (5' Biotin) | 8 OD | HPLC | ￥1,300 | 8個工作日 |
| A04008 | 5'-生物素修飾siRNA (5' Biotin) | 9 OD | HPLC | ￥1,500 | 8個工作日 |
| A04009 | 5'-生物素修飾siRNA (5' Biotin) | 10 OD | HPLC | ￥1,600 | 8個工作日 |
| A04010 | 5'-生物素修飾siRNA (5' Biotin) | 25 OD | HPLC | ￥3,200 | 10個工作日 |
| A04011 | 5'-生物素修飾siRNA (5' Biotin) | 50 OD | HPLC | ￥5,800 | 12個工作日 |
| A04012 | 5'-生物素修飾siRNA (5' Biotin) | 100 OD | HPLC | ￥9,000 | 15個工作日 |
| A04013 | 5'-生物素修飾siRNA (5' Biotin) | 250 OD | HPLC |
詢價? |
問詢 |
| A04014 | 5'-氨基修飾siRNA (5' Amine) | 2 OD | HPLC | ￥650 | 8個工作日 |
| A04015 | 5'-氨基修飾siRNA (5' Amine) | 3 OD | HPLC | ￥730 | 8個工作日 |
| A04016 | 5'-氨基修飾siRNA (5' Amine) | 4 OD | HPLC | ￥800 | 8個工作日 |
| A04017 | 5'-氨基修飾siRNA (5' Amine) | 5 OD | HPLC | ￥900 | 8個工作日 |
| A04018 | 5'-氨基修飾siRNA (5' Amine) | 6 OD | HPLC | ￥1,000 | 8個工作日 |
| A04019 | 5'-氨基修飾siRNA (5' Amine) | 7 OD | HPLC | ￥1,200 | 8個工作日 |
| A04020 | 5'-氨基修飾siRNA (5' Amine) | 8 OD | HPLC | ￥1,300 | 8個工作日 |
| A04021 | 5'-氨基修飾siRNA (5' Amine) | 9 OD | HPLC | ￥1,500 | 8個工作日 |
| A04022 | 5'-氨基修飾siRNA (5' Amine) | 10 OD | HPLC | ￥1,600 | 8個工作日 |
| A04023 | 5'-氨基修飾siRNA (5' Amine) | 25 OD | HPLC | ￥3,200 | 10個工作日 |
| A04024 | 5'-氨基修飾siRNA (5' Amine) | 50 OD | HPLC | ￥5,800 | 12個工作日 |
| A04025 | 5'-氨基修飾siRNA (5' Amine) | 100 OD | HPLC | ￥9,000 | 15個工作日 |
| A04026 | 5'-氨基修飾siRNA (5' Amine) | 250 OD | HPLC |
詢價? |
問詢 |
| A04027 | 5'-磷酸基修飾siRNA (5' Phosphate) | 2 OD | HPLC | ￥650 | 8個工作日 |
| A04028 | 5'-磷酸基修飾siRNA (5' Phosphate) | 3 OD | HPLC | ￥730 | 8個工作日 |
| A04029 | 5'-磷酸基修飾siRNA (5' Phosphate) | 4 OD | HPLC | ￥800 | 8個工作日 |
| A04030 | 5'-磷酸基修飾siRNA (5' Phosphate) | 5 OD | HPLC | ￥900 | 8個工作日 |
| A04031 | 5'-磷酸基修飾siRNA (5' Phosphate) | 6 OD | HPLC | ￥1,000 | 8個工作日 |
| A04032 | 5'-磷酸基修飾siRNA (5' Phosphate) | 7 OD | HPLC | ￥1,200 | 8個工作日 |
| A04033 | 5'-磷酸基修飾siRNA (5' Phosphate) | 8 OD | HPLC | ￥1,300 | 8個工作日 |
| A04034 | 5'-磷酸基修飾siRNA (5' Phosphate) | 9 OD | HPLC | ￥1,500 | 8個工作日 |
| A04035 | 5'-磷酸基修飾siRNA (5' Phosphate) | 10 OD | HPLC | ￥1,600 | 8個工作日 |
| A04036 | 5'-磷酸基修飾siRNA (5' Phosphate) | 25 OD | HPLC | ￥3,200 | 10個工作日 |
| A04037 | 5'-磷酸基修飾siRNA (5' Phosphate) | 50 OD | HPLC | ￥5,800 | 12個工作日 |
| A04038 | 5'-磷酸基修飾siRNA (5' Phosphate) | 100 OD | HPLC | ￥9,000? | 15個工作日 |
| A04039 | 5'-磷酸基修飾siRNA (5' Phosphate) | 250 OD | HPLC |
詢價? |
問詢 |
| A04040 | 5'-巰基修飾siRNA (5' Thiol) | 2 OD | HPLC | ￥650 | 8個工作日 |
| A04041 | 5'-巰基修飾siRNA (5' Thiol) | 3 OD | HPLC | ￥730 | 8個工作日 |
| A04042 | 5'-巰基修飾siRNA (5' Thiol) | 4 OD | HPLC | ￥800 | 8個工作日 |
| A04043 | 5'-巰基修飾siRNA (5' Thiol) | 5 OD | HPLC | ￥900 | 8個工作日 |
| A04044 | 5'-巰基修飾siRNA (5' Thiol) | 6 OD | HPLC | ￥1,000 | 8個工作日 |
| A04045 | 5'-巰基修飾siRNA (5' Thiol) | 7 OD | HPLC | ￥1,200 | 8個工作日 |
| A04046 | 5'-巰基修飾siRNA (5' Thiol) | 8 OD | HPLC | ￥1,300 | 8個工作日 |
| A04047 | 5'-巰基修飾siRNA (5' Thiol) | 9 OD | HPLC | ￥1,500 | 8個工作日 |
| A04048 | 5'-巰基修飾siRNA (5' Thiol) | 10 OD | HPLC | ￥1,600 | 8個工作日 |
| A04049 | 5'-巰基修飾siRNA (5' Thiol) | 25 OD | HPLC | ￥3,200 | 10個工作日 |
| A04050 | 5'-巰基修飾siRNA (5' Thiol) | 50 OD | HPLC | ￥5,800 | 12個工作日 |
| A04051 | 5'-巰基修飾siRNA (5' Thiol) | 100 OD | HPLC | ￥9,000 | 15個工作日 |
| A04052 | 5'-巰基修飾siRNA (5' Thiol) | 250 OD | HPLC |
詢價? |
問詢 |
| A04053 | 5'-膽固醇修飾siRNA (5' Cholesterol) | 2 OD | HPLC | ￥650 | 8個工作日 |
| A04054 | 5'-膽固醇修飾siRNA (5' Cholesterol) | 3 OD | HPLC | ￥730 | 8個工作日 |
| A04055 | 5'-膽固醇修飾siRNA (5' Cholesterol) | 4 OD | HPLC | ￥800 | 8個工作日 |
| A04056 | 5'-膽固醇修飾siRNA (5' Cholesterol) | 5 OD | HPLC | ￥900 | 8個工作日 |
| A04057 | 5'-膽固醇修飾siRNA (5' Cholesterol) | 6 OD | HPLC | ￥1,000 | 8個工作日 |
| A04058 | 5'-膽固醇修飾siRNA (5' Cholesterol) | 7 OD | HPLC | ￥1,200 | 8個工作日 |
| A04059 | 5'-膽固醇修飾siRNA (5' Cholesterol) | 8 OD | HPLC | ￥1,300 | 8個工作日 |
| A04060 | 5'-膽固醇修飾siRNA (5' Cholesterol) | 9 OD | HPLC | ￥1,500 | 8個工作日 |
| A04061 | 5'-膽固醇修飾siRNA (5' Cholesterol) | 10 OD | HPLC | ￥1,600 | 8個工作日 |
| A04062 | 5'-膽固醇修飾siRNA (5' Cholesterol) | 25 OD | HPLC | ￥3,200 | 10個工作日 |
| A04063 | 5'-膽固醇修飾siRNA (5' Cholesterol) | 50 OD | HPLC | ￥5,800 | 12個工作日 |
| A04064 | 5'-膽固醇修飾siRNA (5' Cholesterol) | 100 OD | HPLC | ￥9,000 | 15個工作日 |
| A04065 | 5'-膽固醇修飾siRNA (5' Cholesterol) | 250 OD | HPLC |
詢價? |
問詢 |
| A04066 | 3'-氨基修飾siRNA (3' Amine) | 2 OD | HPLC | ￥650 | 8個工作日 |
| A04067 | 3'-氨基修飾siRNA (3' Amine) | 3 OD | HPLC | ￥730 | 8個工作日 |
| A04068 | 3'-氨基修飾siRNA (3' Amine) | 4 OD | HPLC | ￥800 | 8個工作日 |
| A04069 | 3'-氨基修飾siRNA (3' Amine) | 5 OD | HPLC | ￥900 | 8個工作日 |
| A04070 | 3'-氨基修飾siRNA (3' Amine) | 6 OD | HPLC | ￥1,000 | 8個工作日 |
| A04071 | 3'-氨基修飾siRNA (3' Amine) | 7 OD | HPLC | ￥1,200 | 8個工作日 |
| A04072 | 3'-氨基修飾siRNA (3' Amine) | 8 OD | HPLC | ￥1,300 | 8個工作日 |
| A04073 | 3'-氨基修飾siRNA (3' Amine) | 9 OD | HPLC | ￥1,500 | 8個工作日 |
| A04074 | 3'-氨基修飾siRNA (3' Amine) | 10 OD | HPLC | ￥1,600 | 8個工作日 |
| A04075 | 3'-氨基修飾siRNA (3' Amine) | 25 OD | HPLC | ￥3,200 | 10個工作日 |
| A04076 | 3'-氨基修飾siRNA (3' Amine) | 50 OD | HPLC | ￥5,800 | 12個工作日 |
| A04077 | 3'-氨基修飾siRNA (3' Amine) | 100 OD | HPLC | ￥9,000 | 15個工作日 |
| A04078 | 3'-氨基修飾siRNA (3' Amine) | 250 OD | HPLC |
詢價? |
問詢 |
| A04079 | 硫代磷酸骨架修飾siRNA (phosphorothioate linkage) | 2 OD | HPLC | ￥650 | 8個工作日 |
| A04080 | 硫代磷酸骨架修飾siRNA (phosphorothioate linkage) | 3 OD | HPLC | ￥730 | 8個工作日 |
| A04081 | 硫代磷酸骨架修飾siRNA (phosphorothioate linkage) | 4 OD | HPLC | ￥800 | 8個工作日 |
| A04082 | 硫代磷酸骨架修飾siRNA (phosphorothioate linkage) | 5 OD | HPLC | ￥900 | 8個工作日 |
| A04083 | 硫代磷酸骨架修飾siRNA (phosphorothioate linkage) | 6 OD | HPLC | ￥1,000 | 8個工作日 |
| A04084 | 硫代磷酸骨架修飾siRNA (phosphorothioate linkage) | 7 OD | HPLC | ￥1,200 | 8個工作日 |
| A04085 | 硫代磷酸骨架修飾siRNA (phosphorothioate linkage) | 8 OD | HPLC | ￥1,300 | 8個工作日 |
| A04086 | 硫代磷酸骨架修飾siRNA (phosphorothioate linkage) | 9 OD | HPLC | ￥1,500 | 8個工作日 |
| A04087 | 硫代磷酸骨架修飾siRNA (phosphorothioate linkage) | 10 OD | HPLC | ￥1,600 | 8個工作日 |
| A04088 | 硫代磷酸骨架修飾siRNA (phosphorothioate linkage) | 25 OD | HPLC | ￥3,200 | 10個工作日 |
| A04089 | 硫代磷酸骨架修飾siRNA (phosphorothioate linkage) | 50 OD | HPLC | ￥5,800 | 12個工作日 |
| A04090 | 硫代磷酸骨架修飾siRNA (phosphorothioate linkage) | 100 OD | HPLC | ￥9,000 | 15個工作日 |
| A04091 | 硫代磷酸骨架修飾siRNA (phosphorothioate linkage) | 250 OD | HPLC |
詢價? |
問詢 |
膽固醇修飾siRNA細胞轉染效率評價?????????????????????????????????????????????????
人肺癌細胞A549，常規培養使用含10% FBS (Hyclone)的DMEM培養基(Gibco)(含4.0 mM L-Glutamine, 100 U/ml penicillin, 100 μg/ml Streptomycin)中，37oC 5% CO2培養箱中培養。
細胞轉染
實驗材料及試劑
DMEM培養基+10% FBS?
無血清無抗生素的DMEM培養基(Gibco)?
Trypsin-EDTA Solution (0.25% Trypsin-EDTA, Gbico)?
轉染試劑：Lipofectamine 2000?
12孔板 （Corning）?
siRNA oligo（Genepharma）：?
12#?正義鏈，5'-FAM修飾，反義鏈5'-膽固醇修飾?
sense: 5'-FAM-GUAUGACAACAGCCUCAAGTT -3'
antisense： 5' -Chol -CUUGAGGCUGUUGUCAUACTT -3'
13#?正義鏈， 5'-FAM修飾，反義鏈不修飾?
sense: 5'-FAM-GUAUGACAACAGCCUCAAGTT -3'
antisense： 5' -CUUGAGGCUGUUGUCAUACTT -3'
步驟
1、接種細胞：對于貼壁細胞，轉染前一天，將細胞消化后鋪到12孔板中，接種細胞數約為5×104/孔，使轉染時細胞長至30-50%融合。
2、在50μl 無血清培養基中加入20pmol的siRNA，輕輕混勻；
3、在另一份50μl 無血清培養基中加入如下表所示 Lipofectamine2000的量，混勻，室溫孵育5min；
| 組別 | 1 | 2 | 3 |
| siRNA（pmol） | 20 | 20 | 20 |
| Lipo2000（μl） | - | 0.5 | 1 |
1、合并上述稀釋的siRNA和Lipo2000, 輕柔混合，室溫靜置20min；
2、靜置時，給12孔板換液，每孔加入500μl預熱的無血清培養基；
3、將100 μl 轉染混合物加入孔中。加完后將板輕晃搖勻；
4、37℃靜置培養細胞，6hr后給細胞換液成新鮮的含10%FBS的DMEM培養基，并在熒光顯微鏡下觀察拍照。
實 驗 結 果 與 分 析?
圖1 膽固醇修飾與否的siRNA在不同濃度轉染試劑下的轉染效率（200×）
?
結果顯示，特殊定制的膽固醇修飾siRNA 能夠有效促進siRNA的細胞轉染效率，顯著減少轉染試劑用量。
siRNA轉染的方法
哺乳動物轉染的常見方法有：磷酸鈣共沉淀、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、機械法（例如,顯微注射和基因槍）、陽離子脂質體試劑，其中陽離子脂質體試劑轉染法是目前最常用的轉染方法。
應用脂質體型轉染試劑進行轉染需要注重的幾個方面：轉染試劑的用量、siRNA的用量、轉染時的細胞密度、轉染時的操作順序、細胞與轉染試劑/siRNA復合物的溫浴的時間
A. GP-transfect-Mate 操作流程（24 孔板）
以24 孔板為例，若要檢測基因沉默或者過表達效果，推薦最低RNA oligo終濃度為50nM
（DNA為0.5~1.5μg）；遵循以下操作方法可以高效地將RNA oligo或者DNA轉染貼壁和懸浮培養的多種真核細胞。但是對某些特殊的細胞系和培養條件，或特殊應用等，也需要單獨特別優化，請參考表 1、表2。
1. 細胞鋪板
轉染時細胞密度：一般來說，當細胞密度達到60%～80%時進行轉染可以取得較高的轉染效率(參見表1)。然而，不同細胞的最適轉染密度都不盡相同，因此在初次轉染某種細胞時，可以通過預實驗先確認該細胞最佳的轉染密度。
2. 轉染復合物的制備
（1）將 GP-transfect-Mate轉染試劑放置于室溫中，使用前輕輕混勻。
（2）在1.5 ml無菌離心管中加入50 μl無血清培養基或 OPTI-MEM，并添加適量的轉染試劑(參見表2)，用移液器輕輕混勻，室溫靜置5 min。
（3）同時在另一1.5 ml無菌離心管中加入50 μl無血清培養基或 OPTI-MEM，并添加適量的RNA oligo/DNA (參見表2)，用移液器輕輕混勻，室溫靜置5 min。
（4）將GP-transfect-Mate-培養基混合物滴加至RNA oligo/DNA-培養基混合物中，用移液器輕輕混勻，室溫靜置15-20 min 后，立即轉染。
注：復合物盡量在60 min內使用，并且GP-transfect-Mate-培養基混合物和RNA oligo/DNA-培養基混合物的混合次序非常重要，切勿顛倒。
3. 轉染過程
（1）趁靜置時，給 24 孔板換液，每孔換上 0.4ml 預熱的新鮮培養基。
（2）將 100 μl 轉染混合物加入孔中，終體系為500 μl。加完后將板輕輕晃動以使復合物均勻分布。
（3）37℃靜置培養細胞，4-6h換成完全培養基。24-72 h檢測mRNA表達，48-96 h檢測蛋白表達。
適用范圍
293T, A549, Beas-2B,HeLa,ECA-109,Raw264.7,A375,CAFs,HCT116,HT29,LMH,NE-4C,MGC803，PC-3, PC-12，MCF-7,C6等細胞。
表 1: 貼壁細胞或懸浮細胞接種數量、培養基體積
培養器皿
每孔表面積（cm2）
每孔培養基的體積（ml）
貼壁細胞轉染前一天接種密度
懸浮細胞轉染當天接種密度
96 孔板
0.3
0.1
5 000±2 500
2-5×104
24 孔板
2
0.5
25000±10 000
1-2.5×105
12 孔板
4
1
50000±20 000
2-5×105
6 孔板
10
2
150000±50 000
0.4-1×106
60mm
20
4
400000±100 000
1-2.5×106
100mm
60
10
1*106±250 000
2-5×106
注：貼壁細胞培養密度取決于培養器皿的表面積，而懸浮細胞則由培養基的體積決定。
表 2 不同培養板轉染DNA/RNA oligo的推薦轉染條件
|
培養器皿 |
Growth Medium |
Opti-MEM/ Serum-free Mediumfor complex |
DNA 轉染 |
RNA轉染 |
||
|
DNA/μg |
轉染試劑/μl |
RNA/pmol |
轉染試劑/μl |
|||
|
96 孔板 |
100 μl |
2×10μl |
0.2 |
0.4-1 |
20 |
0.5-1 |
|
24 孔板 |
500 μl |
2×50μl |
0.6 |
1.2-3 |
40 |
1-3 |
|
12 孔板 |
1ml |
2×100μl |
1.5 |
3-6 |
80 |
3-5 |
|
6 孔板 |
2 ml |
2×200 μl |
3 |
6-12.5 |
150 |
5-8 |
|
60mm |
5ml |
2×500 μl |
6-10 |
12-20 |
300 |
10-20 |
|
100mm |
10 ml |
2×1ml |
15-30 |
30-60 |
500 |
25-35 |
注：GP-transfect-Mate轉染試劑的用量在此范圍內進行優化。
選擇最適合的轉染試劑和轉染條件，往往取決于不同的哺乳動物細胞類型和不同的核酸分子。Lipofectamin2000適用于核酸的體內和體外操作，可應用于DNA、RNA、反義寡核苷酸、siRNA的轉染，也可應
用于DNA/siRNA的共轉染操作；是一種新型的高效siRNA轉染試劑。
Lipofectamin2000的應用領域：
1、原代培養細胞和轉化細胞株的基因轉染
2、siRNA高通量轉染試驗
3、DNA轉染；DNA和siRNA的共轉染
4、核酸（siRNA、DNA、RNA）的體內導入試驗
5、貼壁細胞和懸浮細胞轉染
Lipofectamin2000 的特點：
1、不必更換培養基，操作簡便易行，可在半小時內完成操作
2、在含血清培養基中也能表現高轉染效率
3、細胞毒性低；適用細胞廣泛
4、即用型試劑，可在含有抗生素的完全培養基中轉染
5、基于脂質的轉染試劑，確保沒有RNAse活性
6、可介導siRNA高轉染細胞及體內siRNA的高效導入
C. Lipofectamin2000適用的細胞類型
Lipofectamin2000轉染試劑可廣泛應用于多種細胞系的DNA和siRNA轉染如：HeLa(人頸部癌細胞)、MCF-7(人乳房癌細胞)、Hep3B(人肝細胞癌細胞)、COS-7(猴腎細胞)、Neuro-2a(鼠神經母細胞瘤細胞)、NIKS(人角質化細胞)、B16(鼠黑素瘤細胞)、DLD-1(人結腸癌細胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纖維細胞)、HT-29(人結腸腺癌細胞)、A549(人肺癌細胞)、CHO-k1(倉鼠卵巢細胞)和293(腺病毒5 DNA轉化的人胚胎腎細胞),SVRbag4細胞等。
D．轉染前細胞培養
在細胞板上培養細胞時，應使細胞匯合在24小時內達到70-90%。
E．合適的lipofectamin2000用量
合適的siRNA(DNA)：lipofetamin2000比例對核酸的高效轉染有重要影響；我們推薦的DNA：lipofetamin2000為1：0.5—1：5（ug:ul），siRNA：lipofectamin2000為1：0.01-1：0.1（pmol：ul）一般情況下，此范圍內都可獲得高的轉染效率。
F．貼壁細胞轉染程序
選用生理狀態良好的細胞對提高轉染效率很重要。siRNA(DNA)和lipofectamin的用量和兩者的比例可在推薦范圍內適當調整。
1、轉染前一天，4-5′104細胞接種在24孔板上， 0.5mL含FBS和抗生素的DMEM（或Opti-MEM，其他培養基）細胞培養基。
2、選擇用于初期接種的細胞數量，應能在24小時內使細胞匯合達到70-90%。
3、在50μl的DMEM（或Opti-MEM，或其他無血清培養基）無血清培養基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA)，柔和混勻；
4、混勻lipofectamin試劑，用50μl無血清的DMEM或Opti-MEM，或其他無血清培養基）稀釋1μl lipofectamin試劑（DNA轉染時，則加入2μllipofectamin試劑），輕輕混勻，室溫放置5分鐘；
5、將稀釋好的siRNA和lip2000試劑混合；輕柔混勻，室溫放置20分鐘,以便形成siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復合物。
6、將100μl siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復合物加到含有細胞和培養基的培養板的孔中，來回輕柔搖晃細胞培養板板。
7、 細胞在CO2培養箱中37℃溫育24h-48h后，進行轉染后的其它檢測步驟。如果細胞株比較敏感，孵育4-6小時后，除去復合物，更換培養基。
G．懸浮細胞轉染程序
1、轉染的當天，收集細胞離心，用含FBS的培養基重懸。
2、在50μl的DMEM（或Opti-MEM，或其他無血清培養基）無血清的培養基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA)，柔和混勻；
3、混勻lipofectamin試劑，用50μl無血清的DMEM或Opti-MEM，或其他無血清培養基）稀釋1μl lipofectamin試劑（DNA轉染時，則加入2μl lipofectamin試劑），輕輕混勻，室溫放置5分鐘；
4、將稀釋好的siRNA和lipofectamin試劑混合；輕柔混勻，室溫放置20分鐘,以便形成siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復合物。
5、再加入400μL細胞懸浮液（細胞數量決定于細胞類型和轉染后分析測試的時間）。
6、細胞在CO2培養箱中37℃溫育24h-48h后，進行轉染后的其它檢測步驟。如果細胞株比較敏感，孵育4-6小時后，除去復合物，更換培養基。
H．DNA和siRNA共轉染細胞
1、在轉染的前一天，4-5′104細胞接種在24孔板上，0.5 mL含FBS和抗生素的細胞培養基。
2、選擇用于初期接種的細胞密度，應能在24小時內使細胞匯合達到70-90%。
3、在100μL的無血清的培養基中稀釋20pmol siRNA和0.2μg DNA，加入2μl lipofectamin試劑，充分混合，放置20分鐘,以便形成siRNA/ DNA/lipofectamin復合物。
4、將siRNA/ DNA/lipofectamin復合物加入培養基中，輕輕混勻。
5、細胞在37℃溫育24h-48h后，進行轉染后的其它步驟。
I．siRNA體內導入方法
1、適量的siRNA或DNA溶于不含RNA酶的無菌水中，輕輕混勻，因為注射液體積有限，建議采用高濃度的siRNA或DNA，一般DNA為2μg /μL、siRNA為10μg /μL。
2、取適量的DNA、siRNA或siRNA\DNA復合物與lipofectamin混合。例如，在1#管中加入0.5μL的DNA（1μg）和0.5μL的siRNA（5μg），在2#管中加入0.55μL的lipofectamin（24μg）和0.45μL不含RNA酶的無菌水中，將1#管中的溶液加入2#管中，在室溫下溫育30分鐘，以形成siRNA/DNA-lipofectamin復合物。
3、制備的siRNA/DNA-lipofectamine復合物可用于體內導入siRNA、DNA或siRNA\DNA。
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