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普通siRNA
吉瑪普通的siRNA oligo均由HPLC純化，價格便宜，質量上乘。
吉瑪普通的siRNA oligo均由HPLC純化，價格便宜，質量上乘。研究者只需用包裝盒內的通用緩沖溶液稀釋后即可用本公司的RNAi－Mate轉染試劑盒進行后續實驗。
本公司可根據客戶提供的每條基因設計四個靶點的siRNA。即可單獨使用又可隨意組合，以“siRNA Pool”形式提高抑制效率。
| 目錄號 | 產品名稱 | 規格 | 純化方式 | 價格 | 交貨期限 |
| A01001 | 普通siRNA | 2 OD | HPLC | ￥350 | 6個工作日 |
| A01002 | 普通siRNA | 3 OD | HPLC | ￥430 | 6個工作日 |
| A01003 | 普通siRNA | 4 OD | HPLC | ￥500 | 6個工作日 |
| A01004 | 普通siRNA | 5 OD | HPLC | ￥600 | 6個工作日 |
| A01005 | 普通siRNA | 6 OD | HPLC | ￥700 | 6個工作日 |
| A01006 | 普通siRNA | 7 OD | HPLC | ￥800 | 6個工作日 |
| A01007 | 普通siRNA | 8 OD | HPLC | ￥900 | 6個工作日 |
| A01008 | 普通siRNA | 9 OD | HPLC | ￥1,000 | 6個工作日 |
| A01009 | 普通siRNA | 10 OD | HPLC | ￥1,100 | 6個工作日 |
| A01010 | 普通siRNA | 25 OD | HPLC | ￥2,500 | 6個工作日 |
| A01011 | 普通siRNA | 50 OD | HPLC | ￥4,800 | 6個工作日 |
| A01012 | 普通siRNA | 100 OD | HPLC | ￥6,000 | 8個工作日 |
| A01013 | 普通siRNA | 250 OD | HPLC |
詢價? |
詢問 |
| A01014 | 普通siRNA | 500 OD | HPLC |
詢價? |
詢問 |
| A01015 | 普通siRNA | 1250 OD | HPLC | 詢價 | 詢問 |
| A01016 | 普通siRNA | 2500 OD | HPLC | 詢價 | 詢問 |
本公司提供的siRNA相關產品直接作用于靶基因mRNA，因此我們建議您在收到我們的相關產品后先進行實時定量PCR檢測，以確定靶基因mRNA表達水平的變化，進而直接確認我們合成或構建的siRNA產品是否有效。
備注：保證序列設計符合設計原則，保證序列合成和訂單要求一致，保證質量和純度達到共同保證要求，不保證干擾效果。非承諾質量問題，無效也需付款。
所有產品僅限用于科研實驗，僅針對細胞水平，體內效果由于影響因素較多，不做任何體內效果保證。
siRNA Real-Time PCR結果分析
對于RNAi實驗而言，我們通常需要知道的是某一特定細胞在導入siRNA前后某一特定基因的表達變化情況來判斷siRNA起到了Gene Knockdown作用。應用熒光定量PCR的方法，可以通過兩種途徑來實現上述判斷，一是測定特定細胞在導入siRNA前后某一特定基因mRNA數量的變化，即為絕對定量；二是通過檢測特定基因與某一管家基因在在導入siRNA前后相對表達情況的變化，即為相對定量。通常采用相對定量的方法來檢測siRNA的Gene Knockdown作用。
1．Real-Time PCR 實驗設計
Real-Time PCR實驗設計時應包括實驗組（導入siRNA），陰性對照（Negative Control）和Mock Transfaction三組。每組至少三個重復。各組同時檢測目標基因和管家基因的Ct值。下例中以GAPDH為管家基因。
各組重復實驗的Ct值差異不能過大；一般地，重復實驗Ct值差異在1以內是可以接受的。
| 實驗組 | 陰性對照（NC） | Mock Transfection | |||||||
| Target Gene | GAPDH | Target Gene | GAPDH | Target Gene | GAPDH | ||||
| 30.40 | 23.63 | 24.21 | 22.66 | 26.21 | 24.60 | ||||
| 30.35 | 23.40 | 24.60 | 22.56 | 26.15 | 24.31 | ||||
| 30.41 | 23.52 | 24.66 | 22.48 | 26.35 | 24.72 | ||||
3．Real-Time PCR數據分析
以Mock Tansfection為對照（Calibrator），管家基因為Normalizer，ΔΔCt=(Ct目的基因-Ct管家基因)實驗組－( Ct目的基因- Ct管家基因)對照
| Target Gene | GAPDH | ΔCt | ΔΔCt | Target Gene | |
| Average Ct | Average Ct | Target Gene–GAPDH | ΔCt–ΔCt, Mock | Rel. to Mock | |
| Mock | 26.24±0.10 | 24.54±0.21 | 1.7±0.21 | 0.00±0.21 | 1.0(1.16－0.86) |
| 實驗組 | 30.39±0.09*1 | 23.51±0.15*2 | 6.88±0.17*3 | 5.18±0.17 | 0.027(0.024?0.031) |
| NC | 24.49±0.24 | 22.56±0.09 | 1.93±0.25 | 0.23±0.25 | 0.85(0.71－1.01) |
|
注：*1 為同一樣本重復實驗的Ct值的標準偏差，可用Excel 計算得到；? *2 計算公式為 ，例如 ＝0.17 *3 計算公式為2－△△Ct+S 和2－△△Ct－S，S為△△Ct的標準偏差，例如 2－(－2.5+0.10) ＝5.3 |
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A．siRNA轉染的方法
哺乳動物轉染的常見方法有：磷酸鈣共沉淀、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、機械法（例如,顯微注射和基因槍）、陽離子脂質體試劑，其中陽離子脂質體試劑轉染法是目前最常用的轉染方法。
應用脂質體型轉染試劑進行轉染需要注重的幾個方面：轉染試劑的用量、siRNA的用量、轉染時的細胞密度、轉染時的操作順序、細胞與轉染試劑/siRNA復合物的溫浴的時間
B．Lipofectamin2000 轉染試劑
選擇最適合的轉染試劑和轉染條件，往往取決于不同的哺乳動物細胞類型和不同的核酸分子。Lipofectamin2000適用于核酸的體內和體外操作，可應用于DNA、RNA、反義寡核苷酸、siRNA的轉染，也可應
用于DNA/siRNA的共轉染操作；是一種新型的高效siRNA轉染試劑。
Lipofectamin2000的應用領域：
1、原代培養細胞和轉化細胞株的基因轉染
2、siRNA高通量轉染試驗
3、DNA轉染；DNA和siRNA的共轉染
4、核酸（siRNA、DNA、RNA）的體內導入試驗
5、貼壁細胞和懸浮細胞轉染
Lipofectamin2000 的特點：
1、不必更換培養基，操作簡便易行，可在半小時內完成操作
2、在含血清培養基中也能表現高轉染效率
3、細胞毒性低；適用細胞廣泛
4、即用型試劑，可在含有抗生素的完全培養基中轉染
5、基于脂質的轉染試劑，確保沒有RNAse活性
6、可介導siRNA高轉染細胞及體內siRNA的高效導入
C. Lipofectamin2000適用的細胞類型
Lipofectamin2000轉染試劑可廣泛應用于多種細胞系的DNA和siRNA轉染如：HeLa(人宮頸癌細胞)、MCF-7(人乳房癌細胞)、Hep3B(人肝細胞癌細胞)、COS-7(猴腎細胞)、Neuro-2a(鼠神經母細胞瘤細胞)、NIKS(人角質化細胞)、B16(鼠黑素瘤細胞)、DLD-1(人結腸癌細胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纖維細胞)、HT-29(人結腸腺癌細胞)、A549(人肺癌細胞)、CHO-k1(倉鼠卵巢細胞)和293(腺病毒5 DNA轉化的人胚胎腎細胞),SVRbag4細胞等。
D．轉染前細胞培養
在細胞板上培養細胞時，應使細胞匯合在24小時內達到70-90%。
E．合適的lipofectamin2000用量
合適的siRNA(DNA)：lipofetamin2000比例對核酸的高效轉染有重要影響；我們推薦的DNA：lipofetamin2000為1：0.5—1：5（ug:ul），siRNA：lipofectamin2000為1：0.01-1：0.1（pmol：ul）一般情況下，此范圍內都可獲得高的轉染效率。
F．貼壁細胞轉染程序
選用生理狀態良好的細胞對提高轉染效率很重要。siRNA(DNA)和lipofectamin的用量和兩者的比例可在推薦范圍內適當調整。
1、轉染前一天，4-5′104細胞接種在24孔板上， 0.5mL含FBS和抗生素的DMEM（或Opti-MEM，其他培養基）細胞培養基。
2、選擇用于初期接種的細胞數量，應能在24小時內使細胞匯合達到70-90%。
3、在50μl的DMEM（或Opti-MEM，或其他無血清培養基）無血清培養基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA)，柔和混勻；
4、混勻lipofectamin試劑，用50μl無血清的DMEM或Opti-MEM，或其他無血清培養基）稀釋1μl lipofectamin試劑（DNA轉染時，則加入2μllipofectamin試劑），輕輕混勻，室溫放置5分鐘；
5、將稀釋好的siRNA和lip2000試劑混合；輕柔混勻，室溫放置20分鐘,以便形成siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復合物。
6、將100μl siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復合物加到含有細胞和培養基的培養板的孔中，來回輕柔搖晃細胞培養板板。
7、 細胞在CO2培養箱中37℃溫育24h-48h后，進行轉染后的其它檢測步驟。如果細胞株比較敏感，孵育4-6小時后，除去復合物，更換培養基。
G．懸浮細胞轉染程序
1、轉染的當天，收集細胞離心，用含FBS的培養基重懸。
2、在50μl的DMEM（或Opti-MEM，或其他無血清培養基）無血清的培養基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA)，柔和混勻；
3、混勻lipofectamin試劑，用50μl無血清的DMEM或Opti-MEM，或其他無血清培養基）稀釋1μl lipofectamin試劑（DNA轉染時，則加入2μl lipofectamin試劑），輕輕混勻，室溫放置5分鐘；
4、將稀釋好的siRNA和lipofectamin試劑混合；輕柔混勻，室溫放置20分鐘,以便形成siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復合物。
5、再加入400μL細胞懸浮液（細胞數量決定于細胞類型和轉染后分析測試的時間）。
6、細胞在CO2培養箱中37℃溫育24h-48h后，進行轉染后的其它檢測步驟。如果細胞株比較敏感，孵育4-6小時后，除去復合物，更換培養基。
H．DNA和siRNA共轉染細胞
1、在轉染的前一天，4-5′104細胞接種在24孔板上，0.5 mL含FBS和抗生素的細胞培養基。
2、選擇用于初期接種的細胞密度，應能在24小時內使細胞匯合達到70-90%。
3、在100μL的無血清的培養基中稀釋20pmol siRNA和0.2μg DNA，加入2μl lipofectamin試劑，充分混合，放置20分鐘,以便形成siRNA/ DNA/lipofectamin復合物。
4、將siRNA/ DNA/lipofectamin復合物加入培養基中，輕輕混勻。
5、細胞在37℃溫育24h-48h后，進行轉染后的其它步驟。
I．siRNA體內導入方法
1、適量的siRNA或DNA溶于不含RNA酶的無菌水中，輕輕混勻，因為注射液體積有限，建議采用高濃度的siRNA或DNA，一般DNA為2μg /μL、siRNA為10μg /μL。
2、取適量的DNA、siRNA或siRNA\DNA復合物與lipofectamin混合。例如，在1#管中加入0.5μL的DNA（1μg）和0.5μL的siRNA（5μg），在2#管中加入0.55μL的lipofectamin（24μg）和0.45μL不含RNA酶的無菌水中，將1#管中的溶液加入2#管中，在室溫下溫育30分鐘，以形成siRNA/DNA-lipofectamin復合物。
3、制備的siRNA/DNA-lipofectamine復合物可用于體內導入siRNA、DNA或siRNA\DNA。
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目錄分類 本商品目錄中的產品介紹按以下內容分類：
1. RNA干擾研究工具
2. MicroRNA研究工具?
產品價格 本產品目錄中標示的價格均為國內統一零售參考價，全部為人民幣價格。如果大量定購時，在標準價格的基礎上有不同程度的優惠。?
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