+400-6900-195
公司產(chǎn)品
shRNA慢病毒載體
慢病毒表達(dá)載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，
慢病毒表達(dá)載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，在細(xì)胞中進(jìn)行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細(xì)胞的感染，目的基因進(jìn)入到宿主細(xì)胞之后，經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄，整合到基因組，從而高水平的表達(dá)效應(yīng)分子。
載體的技術(shù)特點(diǎn)
1、大大提高對于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞， 如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等轉(zhuǎn)導(dǎo)效率
2、快速獲得高水平的表達(dá)
3、目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大大增加
4、將免疫反應(yīng)降到最低
5、能夠插入大的片段(~7.5 kb)
6、能夠應(yīng)用于干細(xì)胞研究
7、最低的細(xì)胞毒性
本公司使用的慢病毒表達(dá)系統(tǒng)，它由三部分組成：慢病毒表達(dá)載體、慢病毒包裝質(zhì)粒、可產(chǎn)生假病毒顆粒的細(xì)胞系。
慢病毒表達(dá)載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，在細(xì)胞中進(jìn)行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細(xì)胞的感染，目的基因進(jìn)入到宿主細(xì)胞之后，經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄，整合到基因組，從而高水平的表達(dá)效應(yīng)分子。
慢病毒介導(dǎo)的 siRNA活體實(shí)驗(yàn)用病毒液服務(wù)流程
對于活體 RNAi實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，吉瑪公司可以為您生產(chǎn)高質(zhì)量的病毒液，服務(wù)流程如下：
根據(jù)目的基因相關(guān)信息（序列，序列號(hào)等），利用高效的設(shè)計(jì)軟件，設(shè)計(jì) siRNA序列，針對每條目的基因，我們設(shè)計(jì)4條siRNA序列，其中1條序列為陰性對照組；
根據(jù)設(shè)計(jì)好的 siRNA序列，設(shè)計(jì)，合成兩條互補(bǔ)的短片段的DNA；
對合成好的 DNA片段進(jìn)行稀釋，退火，連接到線形化處理過的載體，轉(zhuǎn)化，涂平板，過夜培養(yǎng)；
通過 PCR的方法篩選陽性菌落，進(jìn)行測序，分析測序結(jié)果；
對于測序正確的重組質(zhì)粒，提取和純化高質(zhì)量的不含內(nèi)毒素的 siRNA病毒穿梭質(zhì)粒；
利用構(gòu)建好的質(zhì)粒做轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)， 48小時(shí)后通過實(shí)時(shí)熒光定量和Western的方法分析目的基因，篩選出一條最有效的siRNA序列；
篩選出的高效重組載體和病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 293T細(xì)胞，進(jìn)行病毒包裝和生產(chǎn)，收集病毒液；
濃縮、純化病毒液，測定滴度；
提供高質(zhì)量的病毒液給客戶（對于活體實(shí)驗(yàn)，我們建議的病毒基本單位為 1×10^9TU/ml ，對于小鼠尾靜脈給藥建議50~100ul/只）
Lentiviral shRNA的基因沉默效率
Lentiviral shRNA 抑制生長導(dǎo)管形成
Lentiviral shRNA 引起的表型變化
即用型Lentivirus shRNA構(gòu)建包裝服務(wù)
Lentivirus shRNA服務(wù)特點(diǎn)：
1、適用于原代培養(yǎng)細(xì)胞，難以轉(zhuǎn)染的各種細(xì)胞
2、可用于制備多種穩(wěn)定沉默特定基因的細(xì)胞株
3、您通過GenePharma SupersilencingTM Vector方法篩選到有效的的基因沉默靶點(diǎn)，如果您需要構(gòu)建慢病毒載體來滿足實(shí)驗(yàn)需求
Lentivirus shRNA載體
GenePharma Supersilencing Vector 干擾載體
包裝載體：Helper vector-I
Helper vector-II
Helper vector-III
提高包裝效率和對特定細(xì)胞的感染力,提高生物安全性
品質(zhì)保證
客戶自己提供的序列委托我們制備的病毒顆粒，我們確保制備的病毒顆粒攜帶片段的正確性，確保病毒顆粒的總數(shù)和病毒顆粒的滴度達(dá)到合同規(guī)定的要求。
siRNA高效表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建
1. 通過專業(yè)設(shè)計(jì)人員的精心篩選獲得欲篩選的siRNA序列。
2. 設(shè)計(jì)siRNA 正義、反義鏈，選擇相應(yīng)loop結(jié)構(gòu)，加上酶切位點(diǎn)的目的序列。
3. 合成相應(yīng)的DNA序列，然后克隆于相應(yīng)的慢病毒表達(dá)載體。
4. 將載體轉(zhuǎn)化到宿主菌中進(jìn)行克隆、篩選，得到質(zhì)粒重組體即siRNA表達(dá)載體。
5. siRNA表達(dá)載體在真核細(xì)胞中可產(chǎn)生siRNA，從而在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生特定基因的沉默效果。此方法是多種siRNA制備方法中唯一可以進(jìn)行長期基因沉默研究的方法。
本公司為您提供siRNA高效表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建服務(wù)。構(gòu)建好的siRNA表達(dá)載體，可直接用于轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行RNA干擾操作。
服務(wù)要求
1. 通過E-mail發(fā)送訂單，告知選定的相應(yīng)的基因信息，待構(gòu)建的靶點(diǎn)信息。靶基因在NCBI數(shù)據(jù)庫中的Gene ID、Accession No.
2. 我們可為您免費(fèi)設(shè)計(jì)siRNA序列.
訂購流程
1. 請用E-mail或者電話聯(lián)系吉瑪公司。E-mail:order@genepharma.com;Tel:021-51320195。
2. 根據(jù)客戶提供的基因信息設(shè)計(jì)siRNA序列，并由客戶確認(rèn)。
3. 根據(jù)客戶提供的siRNA序列信息或經(jīng)客戶確認(rèn)的siRNA序列信息設(shè)計(jì)引物。
4. 根據(jù)所選擇的慢病毒載體構(gòu)建相應(yīng)的siRNA表達(dá)載體。
5. 在完成相應(yīng)的試驗(yàn)后，我們將為您提供一套完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其中包括：實(shí)驗(yàn)操作說明、電子版的測序結(jié)果及彩圖、構(gòu)建好的siRNA慢病毒表達(dá)載體質(zhì)粒及其甘油菌等。
| 目錄號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 交貨期限 |
| C06001 | 慢病毒干擾載體LV-1 (pGLVU6/GFP) | 50μg | ￥1,000 | 15個(gè)工作日 |
| C06002 | 慢病毒干擾載體LV-2N (pGLVU6/Puro) | 50μg | ￥1,000 | 15個(gè)工作日 |
| C06003 | 慢病毒干擾載體LV-3 (pGLVH1/GFP+Puro) | 50μg | ￥1,000 | 15個(gè)工作日 |
| C06004 | 慢病毒干擾載體LV-9N (pGLVU6/mCherry) | 50μg | ￥1,000 | 15個(gè)工作日 |
| C06005 | 慢病毒干擾載體LV-10N (pGLVU6/mCherry/Puro) | 50μg | ￥1,000 | 15個(gè)工作日 |
| C06006 | 慢病毒干擾載體LV-12 (pGLVH6/luci05/Puro) | 50μg | ￥1,000 | 15個(gè)工作日 |
| C06007 | 慢病毒干擾載體LV-15N (pGLVH1/mCherry/Puro) | 50μg | ￥1,000 | 15個(gè)工作日 |
| C06008 | 慢病毒干擾載體LV-16 (pGLVU6/Firefly/Puro) | 50μg | ￥1,000 | 15個(gè)工作日 |
| C06027 | 慢病毒干擾載體 LV-U6-Neo | 50μg | ￥1,000 | 15個(gè)工作日 |
| C06028 | 慢病毒干擾載體 LV-U6-copGFP-T2A-Neo | 50μg | ￥1,000 | 15個(gè)工作日 |
| C06029 | 慢病毒干擾載體 LV-U6-mCherry-T2A-Neo | 50μg | ￥1,000 | 15個(gè)工作日 |
| C06030 | 慢病毒干擾載體 LV-U6-Luci17-T2A-Neo | 50μg | ￥1,000 | 15個(gè)工作日 |
吉瑪基因shRNA慢病毒載體圖譜
|
|
慢病毒載體是一類重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,由於其結(jié)構(gòu)和功能的特點(diǎn)作為一種重要的基因轉(zhuǎn)移工具被應(yīng)用於 基因治療和細(xì)胞分子生物學(xué)研究領(lǐng)域，區(qū)別一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，它對分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能 力。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而達(dá)到持久性表達(dá)。在感染能力方面可有效地感染 神經(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞，從而達(dá)到良好的的基因治 療效果。慢病毒載體的研究發(fā)展得很快，研究的也非常深入。在美國已經(jīng)開展了臨床研究，效果非常理想，因 此具有廣闊的應(yīng)用前景。
1、 大大提高對於一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞， 如原代細(xì) 胞、干細(xì)胞、不分裂的細(xì)胞等轉(zhuǎn)導(dǎo)效率
2、 目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大大增加
3、能夠插入大的片段(~ 7.5 kb)
4、最低的細(xì)胞毒性
慢病毒滴度檢測照片
200×熒光顯微鏡下觀察熒光進(jìn)行滴度檢測96孔細(xì)胞板 10ul陰性對照病毒原液稀釋10-5后，
1ml病毒原液滴度100（一個(gè)視野100個(gè)熒光細(xì)胞）×4（平均4個(gè)視野）×105（稀釋倍數(shù)）×100=4×10^9 TU/ml
慢病毒介導(dǎo)的 siRNA活體實(shí)驗(yàn)用病毒液服務(wù)流程
對於活體 RNAi實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，吉瑪可以為您生產(chǎn)高質(zhì)量的病毒液，服務(wù)流程如下：
1、根據(jù)目的基因相關(guān)信息（序列，序列號(hào)等），利用高效的設(shè)計(jì)軟件，設(shè)計(jì) shRNA序列，針對每條目的
基因，我們設(shè)計(jì)4條shRNA序列；
2、根據(jù)設(shè)計(jì)好的 shRNA序列，設(shè)計(jì)，合成兩條互補(bǔ)的短片段的DNA；
3、對合成好的 DNA片段進(jìn)行稀釋，退火，連接到線形化處理過的載體，轉(zhuǎn)化，涂平板，過夜培養(yǎng)；
4、通過 PCR的方法篩選陽性菌落，進(jìn)行測序，分析測序結(jié)果；
5、對於測序正確的重組質(zhì)粒，提取和純化高質(zhì)量的不含內(nèi)毒素的 shRNA病毒穿梭質(zhì)粒；
6、篩選出的高效重組載體和病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 293T細(xì)胞，進(jìn)行病毒包裝和生產(chǎn)，收集病毒液；
7、濃縮、純化病毒液，測定滴度；
8、提供高質(zhì)量的病毒液給客戶（對於活體實(shí)驗(yàn)，我們提供的病毒基本單位為 1×10^8TU/ml ，這個(gè)單位為一只小鼠一次實(shí)驗(yàn)的平均用量）
1.Qu H, Lin K, Wang H, Wei H, Ji B, Yang Z, Peng C, Xiao X, Deng H. 1, 25 (OH) 2D3 improves cardiac dysfunction, hypertrophy, and fibrosis through PARP1/SIRT1/mTOR‐related mechanisms in type 1 diabetes. Molecular nutrition & food research. 2017 May; 61(5).
2.Sun W, Cai H, Zhang G, Zhang H, Bao H, Wang L, Ye J, Qian G, Ge C. Dmrt1 is required for primary male sexual differentiation in Chinese soft-shelled turtle Pelodiscus sinensis. Scientific Reports. 2017 Jun; 7: 4433.
3.Tan X, Lv J, Zhao G, Zhao Z, Li C, Xu Y, Hu M. MicroRNA‐4656 is a prognostic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.
4.Wang H, Shen Q, Zhang X, Yang C, Cui S, Sun Y, Wang L, Fan X, Xu S. The long non-coding RNA XIST controls non-small cell lung cancer proliferation and invasion by modulating miR-186-5p. Cellular Physiology and Biochemistry. 2017 Apr; 41(6): 2221-9. an>4656 is a prognostic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.
5.Yan X, Zhu Z, Xu S, Yang LN, Liao XH, Zheng M, Yang D, Wang J, Chen D, Wang L, Liu X, Liu J, Chen RH, Zhou XZ, Lu KP, Liu H. MicroRNA-140-5p inhibits hepatocellular carcinoma by directly targeting the unique isomerase Pin1 to block multiple cancer-driving pathways. Scientific Reports. 2017; 7: 45915. stic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.
6.Yu F, Guo Y, Chen B, Shi L, Dong P, Zhou M, Zheng J. LincRNA-p21 Inhibits the Wnt/β-Catenin Pathway in Activated Hepatic Stellate Cells via Sponging MicroRNA-17-5p. Cellular Physiology and Biochemistry. 2017 Jun; 41(5): 1970-80. mso-bidi-language:AR-SA'> stic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.
7.Xu Z, Han K, Chen J, Wang C, Dong Y, Yu M, Bai R, Huang C, Hou L. VEGF is neuroprotective against ischemic brain injury by inhibiting scavenger receptor A expression on microglia. Journal of Neurochemistry. 2017 Jun. 0-80. mso-bidi-language:AR-SA'> stic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.
8.Xu W, Zhang Z, Zou K, Cheng Y, Yang M, Chen H, Wang H, Zhao J, Chen P, He L, Chen X, Geng L, Gong S. MiR-1 suppresses tumor cell proliferation in colorectal cancer by inhibition of Smad3-mediated tumor glycolysis. Cell Death & Disease. 2017 May; 8(5): e2761.
9.Cai H, Yao J, An Y, Chen X, Chen W, Wu D, Luo B, Yang Y, Jiang Y, Sun D, He X. LncRNA HOTAIR acts as competing endogenous RNA to control the expression of Notch3 via sponging miR-613 in pancreatic cancer. Oncotarget. 2017 May 16; 8(20): 32905-17.
10.Chen MB, Ji XZ, Liu YY, Zeng P, Xu XY, Ma R, Guo ZD, Lu JW, Feng JF. Ulk1 over-expression in human gastric cancer is correlated with patients' T classification and cancer relapse. Oncotarget. 2017 May 16; 8(20): 33704-12.
11.Li J, Wang P, Xie Z, Yang R, Li Y, Wu X, Su H, Deng W, Wang S, Liu Z, Cen S, Ouyang Y, Wu Y, Shen H. Elevated TRAF4 expression impaired LPS-induced autophagy in mesenchymal stem cells from ankylosing spondylitis patients. Experimental & Molecular Medicine. 2017 Jun; 49(6): e343.
12.Liu N, Zhang L, Wang Z, Cheng Y, Zhang P, Wang X, Wen W, Yang H, Liu H, Jin W, Zhang Y, Tu Y. MicroRNA-101 inhibits proliferation, migration and invasion of human glioblastoma by targeting SOX9. Oncotarget. 2017 Mar 21; 8(12): 19244-54.
13.Liu W, Mao L, Ji F, Chen F, Hao Y, Liu G. Targeted activation of AMPK by GSK621 ameliorates H2O2-induced damages in osteoblasts. Oncotarget. 2017 Feb 2; 8(6): 10543-52.
14.Zhang C, Zhang W, Lu Y, et al. NudC regulates actin dynamics and ciliogenesis by stabilizing cofilin 1. Cell research. 2016 Feb; 26: 239-53.
目錄分類 本商品目錄中的產(chǎn)品介紹按以下內(nèi)容分類：
1. RNA干擾研究工具
2. MicroRNA研究工具
產(chǎn)品價(jià)格 本產(chǎn)品目錄中標(biāo)示的價(jià)格均為國內(nèi)統(tǒng)一零售參考價(jià)，全部為人民幣價(jià)格。如果大量定購時(shí)，在標(biāo)準(zhǔn)價(jià)格的基礎(chǔ)上有不同程度的優(yōu)惠。
質(zhì)量保證 凡吉瑪公司的產(chǎn)品均有嚴(yán)格的質(zhì)量保證。如果我們發(fā)現(xiàn)確實(shí)存在質(zhì)量問題時(shí)，保證更換產(chǎn)品。如果在到貨后一個(gè)月之內(nèi)用戶無提出異議，我們將視本產(chǎn)品為優(yōu)良產(chǎn)品而不再受理投訴事宜。提出產(chǎn)品異議（或投訴）時(shí)，切莫在產(chǎn)品使用完（或快使用完）后提出，以備本公司回收產(chǎn)品，確認(rèn)產(chǎn)品質(zhì)量。由于訂錯(cuò)產(chǎn)品而產(chǎn)生的退貨情況，原則上由客戶承擔(dān)相關(guān)費(fèi)用。發(fā)生投訴事宜時(shí)，公司只保證在產(chǎn)品價(jià)格額度范圍之內(nèi)酌情賠償，恕不受理超過制品價(jià)格額度以上之部分。退款時(shí)需退還原始發(fā)票。
下單前請務(wù)必核對訂購表客戶信息和訂購內(nèi)容無誤，訂單一經(jīng)確認(rèn)，當(dāng)天即啟動(dòng)生產(chǎn)。 超過當(dāng)日17：00后不能修改或者取消，如果需要取消訂單，由此產(chǎn)生的費(fèi)用，將由客戶承擔(dān)。
【取消訂單費(fèi)用規(guī)則】
（1）當(dāng)日17：00前，免費(fèi)修改或取消。
（2）當(dāng)日17：00到次日17：00前，按該項(xiàng)產(chǎn)品金額的50%收取。
（3）次日17：00后，按該項(xiàng)產(chǎn)品金額的100%收取。