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產(chǎn)品描述

miRNA ?miR-DownTM ?antagomir 及miR-UPTM agomir 產(chǎn)品

Agomir是經(jīng)過(guò)特殊標(biāo)記和化學(xué)修飾的雙鏈小RNA,通過(guò)模擬內(nèi)源性的miRNA來(lái)調(diào)節(jié)靶基因的生物學(xué)功能。吉瑪公司依靠領(lǐng)先的核酸化學(xué)合成技術(shù)，推出miRNA mimics、inhibitor的升級(jí)產(chǎn)品,miRNA agomir和antagomir.為您提供更經(jīng)濟(jì)的實(shí)驗(yàn)方案，更輕松的實(shí)驗(yàn)操作，更完美的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
?
antagomir 和agomir 具有如下優(yōu)點(diǎn)：?

1、與普通miRNA inhibitor和mimics相比，antagomir 和agomir與細(xì)胞膜親和力更高，細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染試劑用量顯著減少。

2、特別適合動(dòng)物體內(nèi)干擾實(shí)驗(yàn).并且在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中具有更高的穩(wěn)定性和抑制效果，可以采用全身注射或局部注射等多種方式給藥，操作簡(jiǎn)便。

3、可富集于靶細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)高效的特異性穩(wěn)定干擾

4、抑制持續(xù)時(shí)間長(zhǎng),至少達(dá)到一周時(shí)間,干擾效果最長(zhǎng)可持續(xù)5-6周。

antagomir 及agomir 化學(xué)修飾結(jié)構(gòu)

antogimir 3’端進(jìn)行膽固醇修飾，5’端兩個(gè)硫代骨架修飾，3’端四個(gè)硫代骨架修飾，全鏈甲氧基修飾。
agomir在反義鏈進(jìn)行修飾，3’端進(jìn)行膽固醇修飾，5’端兩個(gè)硫代骨架修飾，3’端四個(gè)硫代骨架修飾全鏈甲氧基修飾

訂購(gòu)須知

1.?agomir保證序列正確、質(zhì)量和純度達(dá)標(biāo)，達(dá)到共同保證要求，轉(zhuǎn)染效率80%保證一種qPCR方法能檢測(cè)到miRNA上調(diào)顯著性差異（與對(duì)照比較），只接受一次無(wú)效投訴，需款到后發(fā)送重合產(chǎn)品，如果重新合成后再次無(wú)效，則不再接受投訴處理。由于靶基因調(diào)控因素較多，不保證其調(diào)控相關(guān)基因變化。

2.?antagomir保證序列正確、質(zhì)量和純度達(dá)標(biāo)，達(dá)到共同保證要求，但鑒于miRNA抑制劑結(jié)合后不一定降解miRNA，且沒(méi)有變更序列堿基可能，故不保證qPCR方法能檢測(cè)到miRNA下調(diào)顯著性差異（與對(duì)照比較）。

功能介紹與實(shí)驗(yàn)實(shí)例

使用方法

A．siRNA轉(zhuǎn)染的方法

哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)染的常見(jiàn)方法有：磷酸鈣共沉淀、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、機(jī)械法（例如,顯微注射和基因槍）、陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑，其中陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑轉(zhuǎn)染法是目前最常用的轉(zhuǎn)染方法。

應(yīng)用脂質(zhì)體型轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染需要注重的幾個(gè)方面：轉(zhuǎn)染試劑的用量、siRNA的用量、轉(zhuǎn)染時(shí)的細(xì)胞密度、轉(zhuǎn)染時(shí)的操作順序、細(xì)胞與轉(zhuǎn)染試劑/siRNA復(fù)合物的溫浴的時(shí)間


B．Lipofectamin2000 轉(zhuǎn)染試劑

選擇最適合的轉(zhuǎn)染試劑和轉(zhuǎn)染條件，往往取決于不同的哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型和不同的核酸分子。Lipofectamin2000適用于核酸的體內(nèi)和體外操作，可應(yīng)用于DNA、RNA、反義寡核苷酸、siRNA的轉(zhuǎn)染，也可應(yīng)

用于DNA/siRNA的共轉(zhuǎn)染操作；是一種新型的高效siRNA轉(zhuǎn)染試劑。


Lipofectamin2000的應(yīng)用領(lǐng)域：

1、原代培養(yǎng)細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞株的基因轉(zhuǎn)染
2、siRNA高通量轉(zhuǎn)染試驗(yàn)
3、DNA轉(zhuǎn)染；DNA和siRNA的共轉(zhuǎn)染
4、核酸（siRNA、DNA、RNA）的體內(nèi)導(dǎo)入試驗(yàn)
5、貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染


Lipofectamin2000 的特點(diǎn)：?

1、不必更換培養(yǎng)基，操作簡(jiǎn)便易行，可在半小時(shí)內(nèi)完成操作
2、在含血清培養(yǎng)基中也能表現(xiàn)高轉(zhuǎn)染效率
3、細(xì)胞毒性低；適用細(xì)胞廣泛
4、即用型試劑，可在含有抗生素的完全培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)染
5、基于脂質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑，確保沒(méi)有RNAse活性
6、可介導(dǎo)siRNA高轉(zhuǎn)染細(xì)胞及體內(nèi)siRNA的高效導(dǎo)入


C. Lipofectamin2000適用的細(xì)胞類型

Lipofectamin2000轉(zhuǎn)染試劑可廣泛應(yīng)用于多種細(xì)胞系的DNA和siRNA轉(zhuǎn)染如：HeLa(人頸部癌細(xì)胞)、MCF-7(人乳房癌細(xì)胞)、Hep3B(人肝細(xì)胞癌細(xì)胞)、COS-7(猴腎細(xì)胞)、Neuro-2a(鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)、NIKS(人角質(zhì)化細(xì)胞)、B16(鼠黑素瘤細(xì)胞)、DLD-1(人結(jié)腸癌細(xì)胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纖維細(xì)胞)、HT-29(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)、A549(人肺癌細(xì)胞)、CHO-k1(倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞)和293(腺病毒5 DNA轉(zhuǎn)化的人胚胎腎細(xì)胞),SVRbag4細(xì)胞等。


D．轉(zhuǎn)染前細(xì)胞培養(yǎng)

在細(xì)胞板上培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，應(yīng)使細(xì)胞匯合在24小時(shí)內(nèi)達(dá)到70-90%。


E．合適的lipofectamin2000用量

合適的siRNA(DNA)：lipofetamin2000比例對(duì)核酸的高效轉(zhuǎn)染有重要影響；我們推薦的DNA：lipofetamin2000為1：0.5—1：5（ug:ul），siRNA：lipofectamin2000為1：0.01-1：0.1（pmol：ul）一般情況下，此范圍內(nèi)都可獲得高的轉(zhuǎn)染效率。



F．貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染程序

選用生理狀態(tài)良好的細(xì)胞對(duì)提高轉(zhuǎn)染效率很重要。siRNA(DNA)和lipofectamin的用量和兩者的比例可在推薦范圍內(nèi)適當(dāng)調(diào)整。

1、轉(zhuǎn)染前一天，4-5′104細(xì)胞接種在24孔板上， 0.5mL含F(xiàn)BS和抗生素的DMEM（或Opti-MEM，其他培養(yǎng)基）細(xì)胞培養(yǎng)基。
2、選擇用于初期接種的細(xì)胞數(shù)量，應(yīng)能在24小時(shí)內(nèi)使細(xì)胞匯合達(dá)到70-90%。
3、在50μl的DMEM（或Opti-MEM，或其他無(wú)血清培養(yǎng)基）無(wú)血清培養(yǎng)基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA)，柔和混勻；
4、混勻lipofectamin試劑，用50μl無(wú)血清的DMEM或Opti-MEM，或其他無(wú)血清培養(yǎng)基）稀釋1μl lipofectamin試劑（DNA轉(zhuǎn)染時(shí)，則加入2μllipofectamin試劑），輕輕混勻，室溫放置5分鐘；

5、將稀釋好的siRNA和RNAi-Mate試劑混合；輕柔混勻，室溫放置20分鐘,以便形成siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復(fù)合物。
6、將100μl siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復(fù)合物加到含有細(xì)胞和培養(yǎng)基的培養(yǎng)板的孔中，來(lái)回輕柔搖晃細(xì)胞培養(yǎng)板板。
7、 細(xì)胞在CO2培養(yǎng)箱中37℃溫育24h-48h后，進(jìn)行轉(zhuǎn)染后的其它檢測(cè)步驟。如果細(xì)胞株比較敏感，孵育4-6小時(shí)后，除去復(fù)合物，更換培養(yǎng)基。 ?


G．懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染程序

1、轉(zhuǎn)染的當(dāng)天，收集細(xì)胞離心，用含F(xiàn)BS的培養(yǎng)基重懸。
2、在50μl的DMEM（或Opti-MEM，或其他無(wú)血清培養(yǎng)基）無(wú)血清的培養(yǎng)基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA)，柔和混勻；
3、混勻lipofectamin試劑，用50μl無(wú)血清的DMEM或Opti-MEM，或其他無(wú)血清培養(yǎng)基）稀釋1μl lipofectamin試劑（DNA轉(zhuǎn)染時(shí)，則加入2μl lipofectamin試劑），輕輕混勻，室溫放置5分鐘；
4、將稀釋好的siRNA和lipofectamin試劑混合；輕柔混勻，室溫放置20分鐘,以便形成siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復(fù)合物。
5、再加入400μL細(xì)胞懸浮液（細(xì)胞數(shù)量決定于細(xì)胞類型和轉(zhuǎn)染后分析測(cè)試的時(shí)間）。
6、細(xì)胞在CO2培養(yǎng)箱中37℃溫育24h-48h后，進(jìn)行轉(zhuǎn)染后的其它檢測(cè)步驟。如果細(xì)胞株比較敏感，孵育4-6小時(shí)后，除去復(fù)合物，更換培養(yǎng)基。 ?



H．DNA和siRNA共轉(zhuǎn)染細(xì)胞

1、在轉(zhuǎn)染的前一天，4-5′104細(xì)胞接種在24孔板上，0.5 mL含F(xiàn)BS和抗生素的細(xì)胞培養(yǎng)基。
2、選擇用于初期接種的細(xì)胞密度，應(yīng)能在24小時(shí)內(nèi)使細(xì)胞匯合達(dá)到70-90%。
3、在100μL的無(wú)血清的培養(yǎng)基中稀釋20pmol siRNA和0.2μg DNA，加入2μl lipofectamin試劑，充分混合，放置20分鐘,以便形成siRNA/ DNA/lipofectamin復(fù)合物。
4、將siRNA/ DNA/lipofectamin復(fù)合物加入培養(yǎng)基中，輕輕混勻。
5、細(xì)胞在37℃溫育24h-48h后，進(jìn)行轉(zhuǎn)染后的其它步驟。


I．siRNA體內(nèi)導(dǎo)入方法

1、適量的siRNA或DNA溶于不含RNA酶的無(wú)菌水中，輕輕混勻，因?yàn)樽⑸湟后w積有限，建議采用高濃度的siRNA或DNA，一般DNA為2μg /μL、siRNA為10μg /μL。
2、取適量的DNA、siRNA或siRNA\DNA復(fù)合物與lipofectamin混合。例如，在1#管中加入0.5μL的DNA（1μg）和0.5μL的siRNA（5μg），在2#管中加入0.55μL的lipofectamin（24μg）和0.45μL不含RNA酶的無(wú)菌水中，將1#管中的溶液加入2#管中，在室溫下溫育30分鐘，以形成siRNA/DNA-lipofectamin復(fù)合物。
3、制備的siRNA/DNA-lipofectamine復(fù)合物可用于體內(nèi)導(dǎo)入siRNA、DNA或siRNA\DNA。

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

相關(guān)文獻(xiàn)

1.Guo Y, Sun W, Gong T, Chai Y, Wang J, Hui B, Li Y, Song L, Gao Y. miR-30a radiosensitizes non-small cell lung cancer by targeting ATF1 that is involved in the phosphorylation of ATM. Oncology Reports. 2017 Apr; 37(4): 1980-8.

2.Su S, Shao J, Zhao Q, Ren X, Cai W, Li L, Bai Q, Chen X, Xu B, Wang J, Cao J, Zhang W. MiR-30b Attenuates Neuropathic Pain by Regulating Voltage-Gated Sodium Channel Nav1. 3 in Rats. Frontiers in molecular neuroscience. 2017 May; 10: 126.?

3.Tan J, Yang L, Liu C, Yan Z. MicroRNA-26a targets MAPK6 to inhibit smooth muscle cell proliferation and vein graft neointimal hyperplasia. Scientific Reports. 2017 Apr; 7: 46602.

4.Tian L, Zheng F, Li Z, Wang H, Yuan H, Zhang X, Ma Z, Li X, Gao X, Wang B. miR-148a-3p regulates adipocyte and osteoblast differentiation by targeting lysine-specific demethylase 6b. Gene. 2017 Sep 5; 627: 32-9.?

5.Xi Z, Wang P, Xue Y, Shang C, Liu X, Ma J, Li ZQ, Li Z, Bao M, Liu Y. Overexpression of miR-29a reduces the oncogenic properties of glioblastoma stem cells by downregulating Quaking gene isoform 6. Oncotarget. 2017 Apr 11; 8(15): 24949-63.

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7.Zhao C, Li X, Han B, You Z, Qu L, Liu C, Song J, Lian L, Yang N. Gga-miR-219b targeting BCL11B suppresses proliferation, migration and invasion of Marek’s disease tumor cell MSB1. Scientific Reports. 2017 Jun; 7: 4247.?

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9.Wang K, Long B, Zhou L Y, et al. CARL lncRNA inhibits anoxia-induced mitochondrial fission and apoptosis in cardiomyocytes by impairing miR-539-dependent PHB2 downregulation. Nature communications. 2014 Apr 7; 5: 3596.
10.Wang K, Long B, Zhou L Y, et al. CARL lncRNA inhibits anoxia-induced mitochondrial fission and apoptosis in cardiomyocytes by impairing miR-539-dependent PHB2 downregulation. Nature communications. 2014 Apr 7; 5: 3596.

訂購(gòu)須知

目錄分類 本商品目錄中的產(chǎn)品介紹按以下內(nèi)容分類：

1. RNA干擾研究工具
2. MicroRNA研究工具?

產(chǎn)品價(jià)格 本產(chǎn)品目錄中標(biāo)示的價(jià)格均為國(guó)內(nèi)統(tǒng)一零售參考價(jià)，全部為人民幣價(jià)格。如果大量定購(gòu)時(shí)，在標(biāo)準(zhǔn)價(jià)格的基礎(chǔ)上有不同程度的優(yōu)惠。?

質(zhì)量保證 凡吉瑪公司的產(chǎn)品均有嚴(yán)格的質(zhì)量保證。如果我們發(fā)現(xiàn)確實(shí)存在質(zhì)量問(wèn)題時(shí)，保證更換產(chǎn)品。如果在到貨后一個(gè)月之內(nèi)用戶無(wú)提出異議，我們將視本產(chǎn)品為優(yōu)良產(chǎn)品而不再受理投訴事宜。提出產(chǎn)品異議（或投訴）時(shí)，切莫在產(chǎn)品使用完（或快使用完）后提出，以備本公司回收產(chǎn)品，確認(rèn)產(chǎn)品質(zhì)量。由于訂錯(cuò)產(chǎn)品而產(chǎn)生的退貨情況，原則上由客戶承擔(dān)相關(guān)費(fèi)用。發(fā)生投訴事宜時(shí)，公司只保證在產(chǎn)品價(jià)格額度范圍之內(nèi)酌情賠償，恕不受理超過(guò)制品價(jià)格額度以上之部分。退款時(shí)需退還原始發(fā)票。

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