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miRNA模擬體
GMR-miRTM ?microRNA mimics
吉瑪為客戶提供不同長度、不同形式的microRNA mimics,microRNA序列來自sanger miRNA數(shù)據(jù)庫(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences)
GMR-miRTM microRNA mimics的應(yīng)用,利用GMR-miRTM microRNA mimics模擬活體microRNA活性來研究gain-of-function效應(yīng),篩選調(diào)控基因表達(dá)和影響細(xì)胞發(fā)育過程的miRNAs,深入研究miRNA在一些生物過程中的作用,如細(xì)胞的發(fā)育、增殖、分化和凋亡,發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證內(nèi)源性的miRNA target。
目錄號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格(OD)
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純化方式
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價(jià)格
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B01001
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GMR-miRTM?microRNA
single-stranded mimics
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2
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HPLC
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¥350
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B02003
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GMR-miRTM?microRNA
double-stranded mimics
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4
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HPLC |
¥500
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備注:
1. 保證序列正確、質(zhì)量和純度達(dá)標(biāo),達(dá)到共同保證要求,轉(zhuǎn)染效率80%保證一種qPCR方法能檢測到miRNA上調(diào)顯著性差異(與對照比較),只接受一次無效投訴,需款到后發(fā)送重合產(chǎn)品,如果重新合成后再次無效,則不再接受投訴處理。由于靶基因調(diào)控因素較多,不保證其調(diào)控相關(guān)基因變化。
2. 針對circRNA過表達(dá),鑒于不同細(xì)胞,不同circ序列等因素都會(huì)影響環(huán)化效果,我們確保將客戶指定序列構(gòu)建正確(有測序結(jié)果證實(shí),對于高GC重復(fù)序列可能會(huì)有缺失,評估后都會(huì)予以說明),對于成環(huán)效果,不予保證。如果客戶檢測無效且已付款,我們可以免費(fèi)重新更換一次側(cè)翼序列重新構(gòu)建一次。如果再次無效則不再免費(fèi)重做。目前我們成功率大約在70%左右(指環(huán)化轉(zhuǎn)染過表達(dá)測序驗(yàn)證完全正確,如需驗(yàn)證費(fèi)用另計(jì):一條目的circRNA和對照轉(zhuǎn)染工具細(xì)胞293T,陽性和對照及空白細(xì)胞3個(gè)樣品驗(yàn)證環(huán)化表達(dá)效率并測序過表達(dá)組環(huán)化序列,費(fèi)用5000~6000元,預(yù)付50%啟動(dòng)實(shí)驗(yàn),無效只收預(yù)付款)。
產(chǎn)品: GMR-miRTM microRNA mimics
目錄號(hào): B01001
規(guī)格: 2 OD
純化方式: HPLC純化?
產(chǎn)品形式: 干粉?
儲(chǔ)存條件: 在-20℃或者-80℃條件下長期存放
質(zhì)量控制?
PAGE檢測: 產(chǎn)品是準(zhǔn)確分子量大小且經(jīng)過特殊化學(xué)分子修飾的雙鏈mimics分子。?
HPLC純化: 經(jīng)過HPLC純化并測定miRNA mimics,純度》95%?
注意事項(xiàng) : RNA oligo在操作過程中,如果有外源的核酸酶存在,RNA oligo容易發(fā)生降解。在進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)中,請帶手套進(jìn)行操作,盡量避免RNAase污染,試管,移液槍和槍頭都要避免污染。收到產(chǎn)品后盡快儲(chǔ)存在-20℃或-80℃環(huán)境中。?
MicroRNA mimics 的重懸:
1、在最大轉(zhuǎn)速為4,000g的低速條件下離心EP管,讓miRNA mimics 聚集在試管的底部。
2、輕輕的打開管蓋。
3、1OD加入DEPC水125ul,配成20uM的儲(chǔ)存液。
4、柔和地用移液槍吹打儲(chǔ)備液5-6次。
5、根據(jù)具體用量情況分裝,避免多次凍融。
6、在重新儲(chǔ)存的時(shí)候注意密封好EP管。
7、貯存在-80℃,以備使用。
miRNA mimics 是根據(jù)microRNA 成熟體序列設(shè)計(jì)的雙鏈小RNA分子,用于模擬內(nèi)源性成熟體miRNA序列。mimics包括一條與目標(biāo)miRNA成熟體序列一致的序列,以及一條與miRNA成熟體序列互補(bǔ)的序列。特異的miRNA mimics 能夠被導(dǎo)入到表達(dá)對應(yīng)的miRNA細(xì)胞中,模擬microRNA的作用,或者與構(gòu)建有miRNA結(jié)合位點(diǎn)的雙熒光素報(bào)告系統(tǒng)結(jié)合,驗(yàn)證miRNA與靶基因之間的調(diào)控關(guān)系。
mRNA表達(dá)水平分析?
為了分析miRNA的上調(diào)水平,miRNA mimics 可以被轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞并通過 Northern blotting 檢測,以及實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測的方法進(jìn)行檢測。
靶基因表達(dá)水平分析?
通過對轉(zhuǎn)染miRNA mimics 和陰性對照序列的細(xì)胞內(nèi)mRNA靶基因進(jìn)行實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測和western Blotting 檢測,可以檢測靶基因蛋白的表達(dá)水平,驗(yàn)證miRNA與靶基因之間的調(diào)控關(guān)系。
miRNA3’UTR靶位點(diǎn)驗(yàn)證分析
通過將一個(gè)或多個(gè)預(yù)測的miRNA3‘UTR結(jié)合靶位點(diǎn)構(gòu)建到報(bào)告質(zhì)粒上,并將miRNA mimics 和報(bào)告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,mimics可以抑制報(bào)告質(zhì)粒上的報(bào)告基因,從而可以直接檢驗(yàn)mimics和miRNA預(yù)測結(jié)合位點(diǎn)之間的作用關(guān)系。我們建議使用miRNA mimics 陰性對照作為參照,陰性對照的實(shí)驗(yàn)濃度,轉(zhuǎn)染條件與實(shí)驗(yàn)組相同。
轉(zhuǎn)染程序?
轉(zhuǎn)染效率對不同的細(xì)胞株和不同的轉(zhuǎn)染試劑是不同的。
最優(yōu)的轉(zhuǎn)染條件還是需要通過實(shí)驗(yàn)來確定。我們建議優(yōu)化時(shí)的miRNA mimics的濃度范圍可以放寬至1-100nM之間。
培養(yǎng)皿類型 |
96 wells |
24 wells |
12 wells |
6 wells |
轉(zhuǎn)染試劑 |
0.3–1.0 μL |
1–3 μL |
2–4 μL |
3–6 μL |
miRNA Mimicsb |
3 pmol |
15 pmol |
30 pmol |
75 pmol |
細(xì)胞密度c |
6,000 cells/well |
40,000 cells/well |
80,000 cells/well |
200,000 cells/well |
每孔培養(yǎng)基體積 |
0.1 mL |
0.5 mL |
1.0 mL |
2.5 mL |
?優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率是使得miRNA mimics活性最大化的關(guān)鍵因素之一,對每種轉(zhuǎn)染試劑而言,首先要確定一款合適的轉(zhuǎn)染試劑,主要看從以下幾點(diǎn)
1、轉(zhuǎn)染試劑的量?
2、miRNA agomir的量?
3、轉(zhuǎn)染時(shí)的細(xì)胞密度?
4、轉(zhuǎn)染時(shí)的操作順序?
5、細(xì)胞與轉(zhuǎn)染試劑/siRNA復(fù)合物的接觸時(shí)間
1.Chen S, Sun YY, Zhang ZX, Li YH, Xu ZM, Fu WN. Transcriptional suppression of microRNA-27a contributes to laryngeal cancer differentiation via GSK-3β-involved Wnt/β-catenin pathway.?Oncotarget. 2017 Feb 28; 8(9): 14708-18.??
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3.Kong X, Liu F, Gao J. MiR-155 promotes epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma cells through the activation of PI3K/SGK3/β-catenin signaling pathways. Oncotarget. 2016 Oct 4; 7(40): 66051-60.?
4.Li X, Liang Q, Zhang W, Li Y, Ye J, Zhao F, Chen X, Wang S. Bio-inspired bioactive glasses for efficient microRNA and drug delivery. Journal of Materials Chemistry B. 2017 Jul.
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6.Sun Y, Xu J, Xu L, Zhang J, Chan K, Pan X, Li G. MiR-503 Promotes Bone Formation in Distraction Osteogenesis through Suppressing Smurf1 Expression.?Scientific Reports. 2017 Mar; 7: 409.
7.Xue X, Qiu Y, Yang HL. Immunoregulatory Role of MicroRNA-21 in Macrophages in Response to Bacillus Calmette-Guerin Infection Involves Modulation of the TLR4/MyD88 Signaling Pathway.?Cellular Physiology and Biochemistry. 2017 May 12; 42(1): 91-102.
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目錄分類 本商品目錄中的產(chǎn)品介紹按以下內(nèi)容分類:
1. RNA干擾研究工具
2. MicroRNA研究工具?
產(chǎn)品價(jià)格 本產(chǎn)品目錄中標(biāo)示的價(jià)格均為國內(nèi)統(tǒng)一零售參考價(jià),全部為人民幣價(jià)格。如果大量定購時(shí),在標(biāo)準(zhǔn)價(jià)格的基礎(chǔ)上有不同程度的優(yōu)惠。?
質(zhì)量保證 凡吉瑪公司的產(chǎn)品均有嚴(yán)格的質(zhì)量保證。如果我們發(fā)現(xiàn)確實(shí)存在質(zhì)量問題時(shí),保證更換產(chǎn)品。如果在到貨后一個(gè)月之內(nèi)用戶無提出異議,我們將視本產(chǎn)品為優(yōu)良產(chǎn)品而不再受理投訴事宜。提出產(chǎn)品異議(或投訴)時(shí),切莫在產(chǎn)品使用完(或快使用完)后提出,以備本公司回收產(chǎn)品,確認(rèn)產(chǎn)品質(zhì)量。由于訂錯(cuò)產(chǎn)品而產(chǎn)生的退貨情況,原則上由客戶承擔(dān)相關(guān)費(fèi)用。發(fā)生投訴事宜時(shí),公司只保證在產(chǎn)品價(jià)格額度范圍之內(nèi)酌情賠償,恕不受理超過制品價(jià)格額度以上之部分。退款時(shí)需退還原始發(fā)票。
下單前請務(wù)必核對訂購表客戶信息和訂購內(nèi)容無誤,訂單一經(jīng)確認(rèn),當(dāng)天即啟動(dòng)生產(chǎn)。 超過當(dāng)日17:00后不能修改或者取消,如果需要取消訂單,由此產(chǎn)生的費(fèi)用,將由客戶承擔(dān)。
【取消訂單費(fèi)用規(guī)則】
(1)當(dāng)日17:00前,免費(fèi)修改或取消。
(2)當(dāng)日17:00到次日17:00前,按該項(xiàng)產(chǎn)品金額的50%收取。
(3)次日17:00后,按該項(xiàng)產(chǎn)品金額的100%收取。
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