+400-6900-195
mRNA熒光定量PCR試劑盒
Custom Real-Time PCR? Gene Detection Assay |
目錄號
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規格
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價格
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E021001
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50 rxns
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¥600
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E021002
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100 rxns
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¥1,100
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E021003
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200 rxns
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¥2,000
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E021004
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300rxns
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¥2,500
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E021005
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500 rxns
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¥3,600
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試劑盒組成(20μl?反應體系×100次) |
產品特點 |
預先優化好的熒光定量PCR反應體系; 應用TaqMan熒光PCR基因檢測技術; 實驗操作簡便,只需加入模板和Taq 酶即可; 用本試劑盒就可完成目標基因檢測和表達定量研究; 輕松獲得基因表達實驗結果。 |
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服務特點 |
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免費設計引物和探針服務。 免費優化反應體系服務。 免費實驗過程技術支持服務。 |
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試劑盒原理 | |
本試劑盒采用Displacement probe和TaqMan熒光PCR基因檢測技術。原理請參閱請參閱A2、A4及F2頁。 |
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GAPDH Gene Endogenous Control Kit |
目錄號 | 規格 | 價格 |
E03002 | 100 rxns | ¥1,000 | |
E03003 | 200 rxns | ¥1,600 | |
E03004 | 300rxns | ¥2,500 | |
E03005 | 500 rxns | ¥3,800 |
?
試劑盒組成(20μl 反應體系×100次) |
產品特點 |
預先優化好的熒光定量PCR反應體系; 應用TaqMan熒光PCR基因檢測技術檢測樣本中GAPDH基因; 實驗操作簡便,只需加入模板和Taq 酶即可。 可直接用于以GAPDH為內參照的基因表達定量研究 |
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適用的熒光定量PCR儀器 |
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ABI PRISM 7000/7300/7500/7900 MJ-opticon、Opticon2及Chromo4 系列 Bio-Rad IQ系列、Light Cycler、Rotogen 3000 X3000P/4000、FTC-2000 |
?
β-actin Gene Endogenous Control Kit |
目錄號 | 規格 | 價格 |
E04002 | 100 rxns | ¥1,000 | |
E04003 | 200 rxns | ¥1,600 | |
E04004 | 300rxns | ¥2,500 | |
E04005 | 500 rxns | ¥3,800 |
?
試劑盒組成(20μl 反應體系×100次) |
產品特點 |
預先優化好的熒光定量PCR反應體系; 應用TaqMan熒光PCR基因檢測技術檢測樣本中的β-actin基因; 實驗操作簡便,只需加入模板和Taq 酶即可。 可直接用于以β-actin為內參照的基因表達定量研究。 |
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適用的熒光定量PCR儀器 |
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ABI PRISM 7000/7300/7500/7900 MJ-opticon、Opticon2及Chromo4 系列 Bio-Rad IQ系列、Light Cycler、Rotogen 3000 MX3000P/4000、FTC-2000 |
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目錄號 | 產品名稱 | 規格 | 價格 |
E05001 | B2M (beta-2-microglobulin)?對照試劑盒 | 50 rxns | ¥600 |
E05002 | B2M (beta-2-microglobulin)?對照試劑盒 | 100 rxns | ¥1,100 |
E05003 | B2M (beta-2-microglobulin)?對照試劑盒 | 200 rxns | ¥2,000 |
E05004 | B2M (beta-2-microglobulin)?對照試劑盒 | 300 rxns | ¥2,500 |
E06001 | GUSB (beta glucuronidase)?對照試劑盒 | 50 rxns | ¥600 |
E06002 | GUSB (beta glucuronidase)?對照試劑盒 | 100 rxns | ¥1,100 |
E06003 | GUSB (beta glucuronidase)?對照試劑盒 | 200 rxns | ¥2,000 |
E06004 | GUSB (beta glucuronidase)?對照試劑盒 | 300 rxns | ¥2,500 |
E07001 | HPRT1 (HGPRT)?對照試劑盒 | 50 rxns | ¥600 |
E07002 | HPRT1 (HGPRT)?對照試劑盒 | 100 rxns | ¥1,100 |
E07003 | HPRT1 (HGPRT)?對照試劑盒 | 200 rxns | ¥2,000 |
E07004 | HPRT1 (HGPRT)?對照試劑盒 | 300 rxns | ¥2,500 |
E08001 | PGK1(phosphoglycerate kinase 1)?對照試劑盒 | 50 rxns | ¥600 |
E08002 | PGK1(phosphoglycerate kinase 1)?對照試劑盒 | 100 rxns | ¥1,100 |
E08003 | PGK1(phosphoglycerate kinase 1)?對照試劑盒 | 200 rxns | ¥2,000 |
E08004 | PGK1(phosphoglycerate kinase 1)?對照試劑盒 | 300 rxns | ¥2,500 |
E09001 | PPIA(cyclophilin)?對照試劑盒 | 50 rxns | ¥600 |
E09002 | PPIA(cyclophilin)?對照試劑盒 | 100 rxns | ¥1,100 |
E09003 | PPIA(cyclophilin)?對照試劑盒 | 200 rxns | ¥2,000 |
E09004 | PPIA(cyclophilin)?對照試劑盒 | 300 rxns | ¥2,500 |
E10001 | RPLP0(large ribosomal protein)?對照試劑盒 | 50 rxns | ¥600 |
E10002 | RPLP0(large ribosomal protein)?對照試劑盒 | 100 rxns |
¥1,100 |
E10003 | RPLP0(large ribosomal protein)?對照試劑盒 | 200 rxns | ¥2,000 |
E10004 | RPLP0(large ribosomal protein)?對照試劑盒 | 300 rxns | ¥2,500 |
E11001 | TBP(TATA-box binding protein)?對照試劑盒 | 50 rxns | ¥600 |
E11002 | TBP(TATA-box binding protein)?對照試劑盒 | 100 rxns | ¥1,100 |
E11003 | TBP(TATA-box binding protein)?對照試劑盒 | 200 rxns | ¥2,000 |
E11004 | TBP(TATA-box binding protein)?對照試劑盒 | 300 rxns | ¥2,500 |
E12001 | TFRC(CD71)(transferrin receptor)?對照試劑盒 | 50 rxns | ¥600 |
E12002 | TFRC(CD71)(transferrin receptor)?對照試劑盒 | 100 rxns | ¥1,100 |
E12003 | TFRC(CD71)(transferrin receptor)?對照試劑盒 | 200 rxns | ¥2,000 |
E12004 | TFRC(CD71)(transferrin receptor)?對照試劑盒 |
300 rxns |
¥2,500 |
E13001 | Mouse ACTB(actin, beta)?對照試劑盒 | 50 rxns | ¥600 |
E13002 | Mouse ACTB(actin, beta)?對照試劑盒 | 100 rxns | ¥1,100 |
E13003 | Mouse ACTB(actin, beta)?對照試劑盒 | 200 rxns | ¥2,000 |
E13004 | Mouse ACTB(actin, beta)?對照試劑盒 | 300 rxns | ¥2,500 |
E14001 | Mouse GAPDH 對照試劑盒 | 50 rxns | ¥6000 |
E14002 | Mouse GAPDH?對照試劑盒 | 100 rxns | ¥1,100 |
E14003 | Mouse GAPDH?對照試劑盒 | 200 rxns | ¥2,000 |
E14004 | Mouse GAPDH?對照試劑盒 | 300 rxns | ¥2,500 |
E15001 | Rat ACTB(actin, beta)?對照試劑盒 | 50 rxns | ¥600 |
E15002 | Rat ACTB(actin, beta)?對照試劑盒 | 100 rxns | ¥1,100 |
E15003 | Rat ACTB(actin, beta)?對照試劑盒 | 200 rxns | ¥2,000 |
E15004 | Rat ACTB(actin, beta)?對照試劑盒 | 300 rxns | ¥2,500 |
E16001 | Rat GAPDH?對照試劑盒 | 50 rxns | ¥600 |
E16002 | Rat GAPDH?對照試劑盒 | 100 rxns | ¥1,100 |
E16003 | Rat GAPDH?對照試劑盒 | 200 rxns | ¥2,000 |
E16004 | Rat GAPDH?對照試劑盒 | 300 rxns | ¥2,500 |
?其他基因表達及管家基因內參照試劑盒定制流程
*注:如客戶不以來電或Email形式確認地址、電話等相關聯系信息,GenePharma將視此次定制申請為無效申請。
吉瑪提供的mRNA檢測試劑盒為客戶提供了一種便捷,準確的基因定量檢測方法,吉瑪公司為您精心設計的基因特異性引物,并且提供預優化的反應體系,檢測特異性強,擴增效率高,為您提供相關基因研究提供了強有力的工具。
試劑盒組成(20μl 反應體系×100次) 試劑保存 -20℃保存,避免反復凍融。保質期3個月。
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產品特點 |
1、預先優化好的熒光定量PCR反應體系; 2、經實驗室驗證,適用于多種類型的熒光探針和染料; 3、適用于多種不同體積反應體系。 4、使用方便,只需加入酶、模板、探針/染料即可進行定量PCR反應. |
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適用的熒光定量PCR儀器 |
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2、MJ-opticon、Opticon2及Chromo4 系列 3、Bio-Rad IQ系列、Light Cycler、Rotogen 3000 4、MX3000P/4000、FTC-2000 |
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使用方法 | |
Real-time PCR Master Mix的濃度為2×,使用時按5μl/10μl反應體系加入;在加入酶、模板、探針/染料后用水補足至所需體積后即可進行Real-time PCR反應 |
產品說明 Ezol?試劑是用于總RNA 抽提的試劑,適用于人類、動物、植物、細菌等組織或細胞的總RNA提取。樣本經?Ezol?充分裂解后加入氯仿離心,形成上清層、中間層和有機層, 收集上清層用異丙醇沉淀RNA。Ezol試劑操作簡便易行,可以同時處理多個樣品,并得到高質量的RNA 。純化的RNA可以直接用于RNA 印跡分析、斑點雜交、poly(A)+ 選擇、體外翻譯、RNA 酶保護分析、RT-PCR 分析、構建 cDNA 文庫等 RNA 研究。 □產品特點 1、可獲得高純度、高產率的 RNA。 2、適用于多種細胞或組織總RNA的提取 3、無論是小量的細胞(5×106)或組織(50-100mg)還是大量的細胞(107)或組織(>1g)都可得到出色的結果。 4、操作簡便,可實現RNA的快速抽提。 □試劑保存 室溫或2-8℃避光保存,保質期12個月。 |
PROTOCOL |
20毫克組織或106-107個細胞/ml?Ezol? 混勻后室溫擱置15min 按200ul氯仿/ml?Ezol加入氯仿,振蕩混勻,冰上放置10分鐘? 4℃ 12,000 rpm 15min 取上層水相移入0.5 ml EP 管內,加入等體積預冷的異丙醇? 顛倒混勻,室溫擱置10~15分鐘 4℃ 12,000 rpm 10min, 輕倒上清,吸水紙上沾干,?按1ml乙醇/ml抽提液加入75%冰乙醇輕旋顛倒洗滌? 4℃ 12,000 rpm 5min 輕倒上清,吸水紙上倒扣沾干,適度干燥? DEPC H2O或TE溶液溶解RNA 28S RNA 18S RNA 圖 RNA電泳圖 |
Trouble Shooting of Ezol Total RNA Extraction Reagent | ||
問題 |
可能原因 |
解決方法 |
抽提的RNA有降解 |
動植物體組織取下后未立即進行抽提或冰凍保存 |
采用新鮮組織,在研磨過程中不斷加入液氮保持組織的生物活性 |
溶液、試管等用具有RNase 污染 |
所有與RNA 抽取相關的器具均須做RNase 去除處理 |
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抽提過程中沒有戴手套或者沒有勤換手套;抽提過程中未注意避免說話,造成唾沫中RNA 酶污染 |
操作過程中要佩戴手套和口罩 |
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RNA 存放的溫度較高 |
RNA長期儲存請置于-80℃冰箱 |
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RNA得率? |
樣品勻漿或裂解不完全 |
適當延長裂解時間,使樣品充分裂解 |
RNA 未完全溶解 |
避免過度干燥并延長RNA溶解時間 |
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未選用RNA 含量豐富的新生、生長旺盛的組織或細胞 |
選擇較新鮮的,生長旺盛的樣品 |
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離心機轉速和離心力不能達到要求 |
加大轉速或延長離心時間 |
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抽提的RNA有DNA 污染 |
樣品勻漿后加入的Ezol量過少 |
在建議用量基礎上減少組織量或加大Ezol使用量,或用DNase I處理 |
將中間層吸入 |
吸取上清時盡量小心操作 |
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加入氯仿前,樣本沒有在室溫下放置15分鐘; |
保證樣品充分裂解;在環境溫度較低的情況下,可適度延長放置時間 |
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加入氯仿后,振蕩過于劇烈 |
輕柔振蕩 |
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樣品量過多 |
在建議用量基礎上減少組織量或加大Ezol?使用量,或用DNase I處理 |
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OD260/OD280比率偏低(<1.65) |
在分光光度計測量前用不適當的溶液稀釋RNA樣品,低離子強度和低pH溶液會增加280 nm的光吸收值 |
采用TE 或Tris-HCl溶解樣品,檢測OD 值 |
勻漿后樣品所加的Ezol用量偏少 |
在建議用量基礎上減少組織量或加大Ezol?使用量 |
結果
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樣品
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內參基因
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目標基因
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|
重復1
|
8.59
|
22.35
|
重復2
|
8.85
|
22.50
|
重復3
|
9.10
|
22.58
|
平均 CT
|
8.85±0.26
|
22.48±0.12
|
DCT
|
—
|
13.63±0.28
|
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待檢 樣品
|
校準 樣品
|
||
內參基因
|
目標基因
|
內參基因
|
目標基因
|
|
重復1
|
8.59
|
22.35
|
8.50
|
21.92
|
重復2
|
8.85
|
22.50
|
8.72
|
22.09
|
重復3
|
9.10
|
22.58
|
9.00
|
22.37
|
Mean CT
|
8.85±0.26
|
22.48±0.12
|
8.74±0.25
|
22.13±0.23
|
DCT
|
—
|
13.63±0.28
|
—
|
13.39±0.34
|
DDCT
|
—
|
0.24±0.44
|
—
|
0.00±0.48
|
2-DDCT
|
—
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0.85(0.62~1.15)
|
—
|
1.00(0.72~1.39)
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【試劑盒簡介】
mRNA基因檢測試劑盒是一款基于熒光定量PCR平臺所開發,用于特異檢測mRNA基因表達水平的試劑盒。
【原理】
Sybr Green I 是一種與雙鏈DNA小溝結合的熒光染料,Sybr Green I只與雙鏈DNA結合才能發出熒光,而不摻入鏈中的Sybr染料分子不會發射任何熒光信號,熒光信號與雙鏈DNA分子數成正比,隨著擴增產物增加而增加,熒光信號的強度代表了反應體系中雙鏈DNA分子的數量。以Sybr Green I作為檢測信號的熒光定量PCR方法稱為染料法。
mRNA定量分析包括兩個步驟:特異性或隨機引物N6的逆轉錄反應和實時熒光定量PCR。對于逆轉錄反應這一過程而言,當特定mRNA由于含有使反轉錄酶終止的序列而難于拷貝其全長序列時,可采用隨機六聚體引物這一不特異的引物來拷貝全長mRNA。用此種方法時,體系中所有RNA分子全部充當了cDNA第一鏈模板。而特異性引物是目標RNA的互補序列,第一條鏈的合成可由與mRNA 3’端最靠近的配對引物起始,用特異性引物僅產生所需要的cDNA,使后續的PCR擴增更為特異。吉瑪采用特異性引物來進行逆轉錄反應。
熒光定量PCR分析
1) 引物設計
2)儀器與設備
實時熒光定量通用試劑(Cat# GMRS-001吉瑪, 上海)
FTC3000 實時熒光定量PCR儀 (楓嶺)
a.總RNA提取
1. 將細胞用預冷PBS緩沖液洗2遍,加1ml Ezol 裂解液重懸。
2. 加入0.2ml三氯甲烷,劇烈搖動10s,室溫放置3分鐘。
3. 4℃,12,000 x g離心20min。
4. 將上清水相轉移至另一新的無RNA酶離心管中,并加入等體積的100%乙醇。
5. 吸取全部樣品,加入帶有2ml收集管的mini-spin離心柱。8,000 x g,室溫離心15 s,棄盡流穿液。
6. 將剩余的樣品轉移至離心柱,重復第6步。
7. 往離心柱中加入700μl WB,輕蓋蓋子, 8,000 x g,室溫離心15 s,棄盡流穿液。
8. 重復第8步,用500μl WB洗滌離心柱三次。
9. 將離心柱轉移至一新的無RNA酶的1.5ml離心管中,往硅膠膜中央滴加50μl DEPC水,4℃,10,000 x g離心3min洗脫RNA。
【實驗體系】
b.mRNA 逆轉錄反應體系
*注意:使用前請將RT Primer稀釋成1μM。
Component |
Final Con. |
Vol/rxn |
RNA 模板 |
1-3μg |
2μl |
Random N6(100μM)/ Gene Specific RT Primer(1μM) |
25μM/60nM |
5μl/1.2μl |
70℃ 5min 加入下述反應體系
Component |
Final Con. |
Vol/rxn |
5×RT buffer |
1× |
4μl |
dNTP(10mM) |
0.375mM |
0.75μl |
MMLV Reverse Transctiptase (200U/μl) |
0.5 U/μl |
0.25μl |
RNase Free H2O |
|
To 13μl / 16.8μl |
42℃,45min; 85℃,5min; 4℃保存。
*注意:如果需要在同一管體系內同時檢測目的基因和內參基因,則只需加入相同終濃度的內參基因RT引物量,把多余的水的體積扣除即可。PCR反應時必須分管做。
c.mRNA 實時熒光定量反應體系
Component |
Final Con. |
Vol/rxn |
2× Real-time PCR Master Mix |
1× |
10μl |
Gene specific Primer set (10uM) |
0.2μM |
0.4μl |
ROX referrence (50×) |
1×/5× |
0.4μl/2μl |
cDNA |
— |
2μl |
Taq DNA ploymerase (5U/μl) |
1U |
0.2μl |
RNase Free H2O |
|
To 20μl |
d.定量PCR反應程序
反應程序:
95℃ 3min;40cycles of 95℃ 12s, 62℃ 40s;
62℃時采集信號,選擇SYBR Green或者FAM通道。
1.Zhou Z, Wan J, Hou X, Geng J, Li X, Bai X. MicroRNA-27a promotes podocyte injury via PPARγ-mediated β-catenin activation in diabetic nephropathy. Cell death & disease. 2017 Mar; 8(3): e2658.?
2.Zhong C, Feng J, Lin X, Bao Q. continuous release of bone morphogenetic protein-2 through nano-graphene oxide-based delivery influences the activation of the NF-κB signal transduction pathway. International Journal of Nanomedicine. 2017 Feb; 12: 1215-26.
3.Xu W, Zhang Z, Zou K, Cheng Y, Yang M, Chen H, Wang H, Zhao J, Chen P, He L, Chen X, Geng L, Gong S. MiR-1 suppresses tumor cell proliferation in colorectal cancer by inhibition of Smad3-mediated tumor glycolysis. Cell Death & Disease. 2017 May; 8(5): e2761.?
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目錄分類 本商品目錄中的產品介紹按以下內容分類:
1. RNA干擾研究工具
2. MicroRNA研究工具?
產品價格 本產品目錄中標示的價格均為國內統一零售參考價,全部為人民幣價格。如果大量定購時,在標準價格的基礎上有不同程度的優惠。?
質量保證 凡上海吉瑪制藥技術有限公司的產品均有嚴格的質量保證。如果我們發現確實存在質量問題時,保證更換產品。如果在到貨后一個月之內用戶無提出異議,我們將視本產品為優良產品而不再受理投訴事宜。提出產品異議(或投訴)時,切莫在產品使用完(或快使用完)后提出,以備本公司回收產品,確認產品質量。由于訂錯產品而產生的退貨情況,原則上由客戶承擔相關費用。發生投訴事宜時,公司只保證在產品價格額度范圍之內酌情賠償,恕不受理超過制品價格額度以上之部分。退款時需退還原始發票。
針對circRNA檢測qPCR引物,鑒于不同細胞,不同circ序列等表達豐度有差異,有的甚至非常低或序列本身不是很確切,所以我們針對目的基因設計3對引物驗證。如果客戶檢測無效且已付款,我們可以免費重新設計3對驗證一次。如果再次無效則不再免費重做。目前我們成功率大約在80%左右(根據擴增產物大小電泳或熔解曲線判斷,如需進步對擴增產物測序鑒定費用另計:一對引物一個樣品驗證費用1500元,預付50%啟動實驗,無效只收預付款)。
對于circRNA產品線,目前不保證100%一定成功。
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