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產品描述

RT-PCR服務簡介

RT-PCR檢測服務中采用SYBR Green染料法/探針法進行RT-PCR相對定量檢測服務，即用已知管家基因做為內參照，根據目的基因和管家基因的相對表達作為定量的最后結果。
樣品可提供組織、細胞、RNA、cDNA中的一種,對于提供樣本的大致原則如下：組織樣本,盡可能提供2×2×2mm3體積或以上,新鮮組織可直接提供，不需處理；對于細胞樣本，盡可能提供3×106個細胞左右,加適量Trizol處理即可，確保樣品適于RNA抽提。RNA、cDNA含量根據同等細胞數量的細胞抽提和逆轉錄大致界定。相關情況可以具體協商。樣品吉瑪最長保存期限為30天，也可根據客戶要求在完成實驗后即刻銷毀或寄回客戶。

RT-PCR服務內容


     1.RNA提取質量檢測電泳圖
 
     2.RT-PCR擴增曲線示例（三重復避免系統誤差）
 
     3.RT-PCR數據分析示例（計算組內誤差）
 
     4.RT-PCR結果柱狀圖示例（檢測干擾效率）
 
     5.靶基因與內參溶解曲線圖（檢測擴增質量）
 
     6.DNA片段擴增質量檢測電泳圖


 吉瑪RT-PCR服務提供的結果展示：RNA提取質量檢測電泳圖

收費標準：300元*基因數+70元*樣本數+90元*基因數*樣本數

吉瑪Western-blot服務介紹

定義

Western Blot即蛋白免疫印跡，是根據抗原抗體的特異性結合檢測樣品中某種蛋白的方法。其利用SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，保證了快速、準確的檢測，對蛋白進行定性和半定量分析。
 
原理
 
1、蛋白分離原理
 
樣品在含有強還原劑的SDS溶液中加熱處理后，蛋白質發生變性和解離，形成帶負電荷的SDS-蛋白質復合物。這種復合物由于結合大量的SDS，電泳時在凝膠中的遷移率不再受蛋白質原有電荷和形狀的影響，而主要取決于蛋白質分子量。
 
2、抗體檢測原理
 
通過SDS-PAGE按照分子量大小分離蛋白質樣品，轉移到PVDF膜或NC膜上，以膜上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體（一抗）起免疫反應，一抗再與酶標記的抗體（二抗）起抗原抗體反應，最后底物化學發光顯色檢測電泳分離的特異性目的蛋白成分。

注：目的一抗另計，其余試劑免費。

對上圖掃描膠片進行條帶的灰度分析，得到量化的數值，并用目的蛋白的灰度值除以內參GAPDF的灰度值以校正誤差，所得結果代表某樣品目的蛋白相對含量。

收費標準：

客戶提供可以用于WB檢測的組織或細胞樣品；

1、每個樣品每個蛋白檢測費用：170元；每種蛋白抗體驗證費用：400元。

2、每個蛋白一張膜：1500元；（每張膜上做一種目的蛋白和相應的內參蛋白，最多可以做到12個目的樣品。一抗另計，其它試劑免費）

3、多種目的蛋白檢測計費：170元*樣品數*目的蛋白數+400元*蛋白數

服務周期：通常2-4周；樣品數量多或蛋白表達豐度較低時，時間周期另外商議。

功能介紹與實驗實例

本實驗采用目的蛋白單克隆抗體來檢測不同組織樣本目的蛋白的表達狀況。?

操作步驟?

每種組織樣本加入200 ul組織細胞裂解液, 使組織完全裂解。裂解物移入離心管中。?

取5ul樣本加入5ul 2×SDS-PAGE loading buffer，100oC加熱處理5分鐘，冰上冷卻。12000 g 離心10分鐘去除不溶性沉淀。
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樣品使用10% SDS-PAGE分離，每孔上樣量為20 ul。?

電泳結束后，將PVDF膜在甲醇中浸泡1分鐘，再使用Transfer Buffer浸泡凝膠、濾紙和在甲醇中浸泡過的PVDF膜10分鐘，然后制備轉移三明治。?

使用Semi-Dry Cell進行半干電泳轉移，轉移條件為30 mA 60 min。?

轉移完畢后，用1×Ponseau S solution染色并標記蛋白質Marker的條帶位置。?

使用Blocking Buffer封閉轉印膜2小時，然后用1×TBST洗滌3次，每次10分鐘。?

加入適當稀釋的一抗，4oC 溫育過夜。用1×TBST洗滌3次，每次15分鐘。?

加入適當稀釋的二抗，室溫溫育2小時。用1×TBST洗滌3次，每次15分鐘。?

用SuperSignal West Pico Chemiluminent Substrates進行化學發光檢測，并對X光片曝光。經顯影定影處理后，膠片用凝膠成像分析系統拍照，使用Gel-Pro Analyzer軟件分析處理。?

結果與分析(D1-D6)





注：條帶從左至右共6個條帶，依次為1.樣品D1.2. 樣品D2 .3. 樣品D3 4. 樣品D4 5.樣品D5 6.樣品D6?
表1 Western blot結果的半定量灰度分析?

使用方法

使用方法

產品說明書

相關文獻

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訂購須知

細胞基質黏附實驗服務：CKK-8法進行檢測。客戶需提供：檢測細胞及其培養條件和處理方法。選擇觀察時間點。檢測包括3-5組細胞，每組3個重復。我們提供的結果包括：1細胞黏附情況照片。2（可選）酶標儀檢測的原始數據與統計分析結果。具體價格敬請來電咨詢。

細胞免疫熒光實驗：利用抗原－抗體特異性結合的原理，用經熒光染料標記的抗體對細胞內的蛋白質進行定性或定量研究的方法。流程：細胞爬片 轉染或藥物處理 固定透化 封閉 一抗孵育 熒光二抗孵育 熒光顯微鏡觀察拍照。客戶需要提供熒光一抗及二抗，具體價格敬請來電咨詢。

酶聯吸附實驗（ELISA)：4步驟幫您輕松檢驗各種蛋白大分子抗原：（1）將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。（2）加受檢標本，保溫反應，去除未結合物質。（3）加酶標抗體，保溫反應。固相免疫標抗體結合。（4）加底物顯色。服務價格：檢測3-5組樣品，每組樣品3個復孔，具體價格敬請來電咨詢。

細胞遷移、侵染實驗服務項目：鋪有Matrigel的特殊濾膜，正常細胞不能自由穿過。在下室中加入趨化劑，上室加有經過處理的重懸腫瘤細胞，具有侵襲能力的腫瘤細胞在趨化劑誘導下開始穿膜運動，并粘附在濾膜下表面。具體價格敬請來電咨詢。

細胞增殖實驗使用CCK-8方法： 據活細胞線粒體內的脫氫酶可將試劑中的有效成分轉變為有顏色的Formazan，并可被酶標儀檢測，間接反應活細胞數量。具體價格敬請來電咨詢。（包括4組細胞，每個樣品3-5個復孔，客戶可以選擇檢測時間點。）

穩定細胞株篩選服務： 1.抗生素篩選濃度確定（致死曲線）：2. 細胞接種：轉染實驗前天接種細胞。轉染時細胞密度達到60%~80%；3. 細胞轉染（脂質體）或侵染（慢病毒）4. 利用質粒抗性篩選穩定干擾細胞株；5. 目的基因干擾效果驗證。 周期2-3個月，提供T25穩篩細胞株一瓶，具體價格敬請來電咨詢。

miRNA靶基因預測雙熒光素酶報告系統：吉瑪采用promega的psicheck2.0載體系統構建靶基因3'UTR系統。該系統可檢測siRNA/miRNA與靶基因的調控關系，報告熒光（hRluc)驗證si/miRNA調控作用，校正熒光（hluc)檢測質粒表達效率。另外客戶還可選擇構建突變UTR系統。具體價格敬請來電咨詢。

項目具體價各和實驗相關事宜請聯系吉瑪公司：rnaisupport@genepharma.com，電話：021-51320195-8009。雙方協商一致后簽訂技術服務合同，我們嚴格按照服務合同開展技術服務。

下單前請務必核對訂購表客戶信息和訂購內容無誤，訂單一經確認，當天即啟動生產。 超過當日17：00后不能修改或者取消，如果需要取消訂單，由此產生的費用，將由客戶承擔。

【取消訂單費用規則】

（1）當日17：00前，免費修改或取消。

（2）當日17：00到次日17：00前，按該項產品金額的50%收取。

（3）次日17：00后，按該項產品金額的100%收取。