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公司產品
吉瑪全程服務
用戶提供整體實驗方案，吉瑪通過評估客戶需求，圍繞公司特色，結合現有平臺及擴展平臺，利用分子細胞生物學技術，提供真實實驗數據，完成客戶外包試驗。
用戶提供整體實驗方案，吉瑪通過評估客戶需求，圍繞公司特色，結合現有平臺及擴展平臺，利用分子細胞生物學技術，提供真實試驗數據
1、 篩選有效的干擾片段或病毒
1.1 摸索細胞最佳轉染或侵染條件 熒光蛋白指示轉染效率（一般達70%以上）
1.2 RT-PCR
1.2.1 RNA提取質量檢測電泳圖
1.2.2 RT-PCR擴增曲線示例（三重復避免系統誤差）
1.2.3 RT-PCR數據分析示例（計算組內誤差）
1.2.4 RT-PCR結果柱狀圖示例（檢測干擾效率）
1.2.5 靶基因與內參溶解曲線圖（檢測擴增質量）
1.2.6 DNA片段擴增質量檢測電泳圖
1.3 Western Blot
1.3.1 蛋白電泳圖
1.3.2 灰度分析圖
2、 雙熒光素酶系統檢測siRNA,microRNA有效性
吉瑪采用熒光素報告載體系統完成靶基因3' UTR質粒載體構建服務。可提供基于人、小鼠、大鼠基因的UTR構建。 psicheck2.0報告基因檢測系統用來檢測siRNA/miRNA與靶基因是否可能存在調控作用，該報告系統報告熒光(hRluc)，其下游構建了靶基因3' UTR區域，通過對該熒光的監測，即可驗證siRNA/miRNA對該靶標是否有調控作用；另有一校正熒光(hluc)作為穩定內參，用于監測質粒表達效率。 嚴格的實驗體系，要求miRNA與mRNA3'UTR驗證實驗中需要構建靶mRNA的點突變載體，以驗證靶點作用有效性。突變載體構建主要依據預測的miRNA與靶基因3' UTR的穩定結合區域(即種子區)。通過種子區全部堿基或部分堿基突變導致miRNA與靶基因3' UTR區域的結合能力大大降低，從而判斷是否存在miRNA的調控作用。 完成miRNA靶基因報告基因載體構建，需要客戶提供：miRNA具體信息，預測靶基因信息，miRNA與靶mRNA結合位點信息。
| 目錄號 | 產品名稱 | 規格 | 價格 | 交貨期 |
| C09005 | 雙熒光素酶報告實驗載體構建(≤500bp)a | 50 μg | ￥2,500 | 20-30個工作日 |
| C09006 | 雙熒光素酶報告實驗突變載體構建(種子區突變)b | 50 μg | ￥2,500 | 20-30個工作日 |
注：
a.靶基因3' UTR長度須小于500bp，否則價格及合成周期另計；
b.單位點(即1個miRNA-mRNA作用位點)突變價格如上，多位點突變價格及合成周期另計。
2.2雙熒光素酶報告系統檢測服務
吉瑪公司利用同時表達螢火蟲熒光素酶及海腎熒光素酶的雙熒光素酶系統，將靶基因的CDS區或3' UTR種子區構建入載體，通過熒光素酶底物熒光的變化，來佐證siRNA或miRNA與靶基因結合的強弱。
吉瑪公司根據客戶實驗所需，為客戶提供貼心的套餐搭配(以下均針對插入載體序列<500bp)
| 套餐搭配 | 價格 | 周期 |
| A-1.結合靶點預測和UTR序列載體構建 | 2500元/載體 | 10-15個工作日 |
| A-2.結合靶點預測和UTR序列載體構建+加突變體構建 | 4000元/一對載體 | 15-20個工作日 |
| B-1.干擾序列/mimics (2 OD) +構建結合靶點載體(50 μg) | 3500元/靶點 | 10-15個工作日 |
| B-2.干擾序列/mimics (2 OD) +構建結合靶點載體(50 μg)+構建加突變體(50 μg) | 5500元/靶點 | 10-15個工作日 |
| C-1.干擾序列/mimics (2 OD) +構建結合靶點載體(50 μg)+驗證服務 | 10000元/靶點 | 20-25個工作日 |
| C-2.干擾序列/mimics (2 OD) +構建結合靶點載體(50 μg)+構建加突變體+驗證服務 | 12000元/靶點 | 20-25個工作日 |
2.3 雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒
| 產品名稱 | 貨號 | 規格 | 組分 | 儲存 | 價格（元） |
| Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒 | G06001 | 100次 | 細胞裂解液（5×） 15mL | -20℃避光 | ￥1,118 |
| 螢火蟲熒光素酶底物（200×） 50μL | |||||
| 螢火蟲熒光素酶緩沖液 10mL | |||||
| 海腎熒光素酶底物（200×）50μL | |||||
| 海腎熒光素酶緩沖液 10mL |
3、 進行下游細胞實驗
3.1 下游靶基因表達量的鑒定
常規出示的結果同樣包括：RT-PCR、Western，如果涉及分泌蛋白，可以進行Elisa實驗，客戶可指定檢測方法
3.2 穩定株篩選實驗
在藥物壓力下篩選穩定表達細胞株，常規出示結果包括：RT-PCR、Western，客戶可指定篩選及檢測方法。 實驗過程：1.抗生素篩選濃度確定（致死曲線）：2. 細胞接種：轉染實驗前天接種細胞。轉染時細胞密度達到60%~80%；3. 細胞轉染（脂質體）或侵染（慢病毒）4. 利用質粒抗性篩選穩定干擾細胞株；5. 目的基因干擾效果驗證。 周期2-3個月，提供T25穩篩細胞株一瓶，具體價格敬請來電咨詢。
3.3 克隆形成率實驗
采用結晶紫或吉姆薩染色法，檢測轉入靶基因后細胞增殖情況，常規出示結果包括：克隆染色圖及柱狀分析圖
3.4 細胞增殖實驗
采用CCK8或MTT方法，檢測細胞增殖的情況，使用CCK-8方法： 據活細胞線粒體內的脫氫酶可將試劑中的有效成分轉變為有顏色的Formazan，并可被酶標儀檢測，間接反應活細胞數量。具體價格敬請來電咨詢。（包括4組細胞，每個樣品3-5個復孔，客戶可以選擇檢測時間點。）
常規出示結果包括：
3.4.1原始讀數（每個樣品5個重復）
3.4.2細胞增殖曲線圖
3.5細胞周期實驗
采用PI染色的方法，在流式細胞儀上對細胞樣品進行細胞周期分析
3.6 細胞凋亡的分析
采用Annexin V / PI ；Annexin V-PE /7-AAD或客戶自己提供合適的試劑盒，在流式細胞儀上對細胞樣品進行細胞。
3.7 細胞遷移實驗（Transwell）
采用結晶紫或DAPI染色法，檢測細胞遷移的能力。或用劃痕進行檢測。客戶需提供：檢測細胞及其培養條件和處理方法。選擇觀察時間點。
3.8 細胞侵襲實驗（Transwell+ Matrigel Basement Membrane Matrix）
采用結晶紫或DAPI染色法，檢測細胞侵襲的能力，鋪有Matrigel的特殊濾膜，正常細胞不能自由穿過。在下室中加入趨化劑，上室加有經過處理的重懸腫瘤細胞，具有侵襲能力的腫瘤細胞在趨化劑誘導下開始穿膜運動，并粘附在濾膜下表面。具體價格敬請來電咨詢。
3.9 細胞劃痕實驗
通過對劃痕部位距離差異的計算，檢測細胞遷移能力
3.10 Confocol實驗：
通過融合熒光蛋白或熒光二抗，鑒定目標蛋白細胞內定位，利用抗原－抗體特異性結合的原理，用經熒光染料標記的抗體對細胞內的蛋白質進行定性或定量研究的方法。流程：細胞爬片 轉染或藥物處理 固定透化 封閉 一抗孵育 熒光二抗孵育 熒光顯微鏡觀察拍照。客戶需要提供熒光一抗及二抗，具體價格敬請來電咨詢。
3.11 粘附實驗部分：
本平臺是借助CCK8試劑盒可以檢測活細胞的功能，檢測不同處理組間的粘附差異。
3.12 酶聯吸附實驗（ELISA) 4步驟幫您輕松檢驗各種蛋白大分子抗原：
（1）將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。（2）加受檢標本，保溫反應，去除未結合物質。（3）加酶標抗體，保溫反應。固相免疫標抗體結合。（4）加底物顯色。服務價格：檢測3-5組樣品，每組樣品3個復孔，具體價格敬請來電咨詢。
| 服務收費標準 | ||||||||||||||||
| 目錄號 | 產品名稱 | 價格 | 交貨期限 | |||||||||||||
| H02001 | RNAi設計服務 | 詢價 | 2個工作日 | |||||||||||||
| H02002 | RNAi相關試劑的合成服務 | 詢價 | 1周 | |||||||||||||
| H02003 | RNAi轉染優化服務 | 詢價 | 1周 | |||||||||||||
| H02004 | RNAi干擾效果檢測服務 | 詢價 | 2周 | |||||||||||||
| H02005 | RNAi穩定細胞株的篩選 | 詢價 | 2個月 | |||||||||||||
| H03001 | 流式細胞技術檢測服務 | 詢價 | 1周 | |||||||||||||
| H04001 | 細胞周期檢測服務 | 詢價 | 1周 | |||||||||||||
| H04002 | 細胞凋亡檢測服務 | 詢價 | 1周 | |||||||||||||
| H04003 | 細胞活性測定服務 | 詢價 | 2周 | |||||||||||||
| H04004 | 細胞基質黏附實驗服務 | 詢價 | 1-2周 | |||||||||||||
| H04005 | 細胞侵襲實驗服務 | 詢價 | 1-2周 | |||||||||||||
| H04006 | 細胞免疫熒光實驗 | 詢價 | 1-2周 | |||||||||||||
| H04007 | 細胞免疫吸附實驗 | 詢價 | 1-2周 | |||||||||||||
1.篩選有效的干擾片段和慢病毒
1.1 ?摸索細胞最佳轉染或侵染條件（一般達70%以上）
收取樣品后，針對靶基因進行RT-PCR及Western Blot檢測：樣品一般包括以下分組：NC（陰性對照組）、B(Blank不作處理組)、M（Mock單加轉染試劑組）及實驗樣品組
1.2 ?RT-PCR提供的數據
1.2.1 ?RNA提取質量檢測電泳圖
?
1.2.4 ?RT-PCR結果柱狀圖示例（檢測干擾效率，樣品包括：NC（陰性對照組）、B(Blank不作處理組)、M（Mock單加轉染試劑組）及實驗樣品組）
3. 進行下游細胞實驗
?
3.1 ?下游靶基因表達量的鑒定：常規出示的結果同樣包括：RT-PCR、wetern，如果涉及分泌蛋白，可以進行Elisa實驗，客戶可指定檢測方法
3.2 ? 穩定株篩選實驗：在藥物壓力下篩選穩定表達細胞株，常規出示結果包括：RT-PCR、Western，客戶可指定篩選及檢測方法
3.3 ?克隆形成率實驗：采用結晶紫或吉姆薩染色法，檢測轉入靶基因后細胞增殖情況，做三重復，消除系統誤差
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3.4 ?細胞增殖實驗：采用CCK8或MTT方法，檢測細胞增殖的情況
3.4.1 ?原始讀數（每個樣品5個重復）
3.6 ?細胞凋亡的分析：采用Annexin V+PI雙染色法，對細胞進行凋亡分析
3.7 ?細胞遷移實驗（Transwell）：采用結晶紫或DAPI染色法，檢測細胞遷移的能力（圖示為結晶紫染色法）
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3.8 ?細胞侵襲實驗（Transwell+ Matrigel Basement Membrane Matrix）：
?
采用結晶紫或DAPI染色法，檢測細胞侵襲的能力（圖示為DAPI染色法）
3.9 ?細胞劃痕實驗：通過對劃痕部位表面積的計算，檢測細胞遷移能力
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使用方法
1.De Silva, T., G. Ye, et al. "Frontiers." Frontiers in Experimental Endocrinology 3.
2.Qi, R., S. Liu, et al. "Biodegradable copolymers with identical cationic segments and their performance in siRNA delivery." Journal of Controlled Release.
3.Zhang, C. Y., J. Chen, et al. "The Contribution of 17beta-Hydroxysteroid Dehydrogenase Type 1 to the Estradiol-Estrone Ratio in Estrogen-Sensitive Breast Cancer Cells." PloS one 7(1): e29835.
4.Hou, H., Y. Zhang, et al. "Inhibitors of Phosphatidylinositol 3鈥?Kinases Promote Mitotic Cell Death in HeLa Cells." PloS one 7(4): e35665.
5.Ye, Q. F., Y. C. Zhang, et al. "siRNA-mediated Silencing of Notch-1 Enhances Docetaxel Induced Mitotic Arrest and Apoptosis in Prostate Cancer Cells." Asian Pacific Journal of Cancer Prevention 13: 2485-2489.
6.Lu, J., D. Sun, et al. "Selection of an Effective Small Interference RNA to Silence Myostatin Gene Expression in Sheep Fibroblast Cells." Biochemical Genetics: 1-10.
7.Tao, Q., X. Fan, et al. "Gender segregation in gene expression and vulnerability to oxidative stress induced injury in ventral mesencephalic cultures of dopamine neurons." Journal of Neuroscience Research.
8.Yuan, Z., X. Wu, et al. "Asymmetric siRNA: new strategy to improve specificity and reduce off-target gene expression." Human Gene Therapy(ja).
9.Lin, Q., J. Chen, et al. "Efficient systemic delivery of siRNA by using high-density lipoprotein-mimicking peptide lipid nanoparticles." Nanomedicine(0): 1-13.
10.Li, S., Z. Liu, et al. "Delivery of Quantum Dot-siRNA Nanoplexes in SK-N-SH Cells for BACE1 Gene Silencing and Intracellular Imaging." Molecular Therapy鈥擭ucleic Acids 1(4): e20.
Na, L., S. M. Min, et al. "S100A4 siRNA Inhibits Human Pancreatic Cancer Cell Invasion In Vitro." Biomed Environ Sci 25(4): 465-470.
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De Silva, T., G. Ye, et al. "Nodal promotes glioblastoma cell growth." Frontiers in Endocrinology 3.
12.Liang, Y., Z. Liu, et al. "Delivery of cationic polymer-siRNA nanoparticles for gene therapies in neural regeneration." Biochemical and Biophysical Research Communications.
13.Sun, Z., Q. Luo, et al. "Role of toll-like receptor 4 on the immune escape of human oral squamous cell carcinoma and resistance of cisplatin-induced apoptosis." Molecular Cancer 11(1): 33.
14.Han, M., Q. Lv, et al. "Overcoming drug resistance of MCF-7/ADR cells by altering intracellular distribution of doxorubicin via MVP knockdown with a novel siRNA polyamidoamine-hyaluronic acid complex." Journal of Controlled Release.
| 服務收費標準 | ||||||
| 目錄號 | 產品名稱 | 價格 | 交貨期限 | |||
| H02001 | RNAi設計服務 | 詢價 | 2個工作日 | |||
| H02002 | RNAi相關試劑的合成服務 | 詢價 | 1周 | |||
| H02003 | RNAi轉染優化服務 | 詢價 | 1周 | |||
| H02004 | RNAi干擾效果檢測服務 | 詢價 | 2周 | |||
| H02005 | RNAi穩定細胞株的篩選 | 詢價 | 2個月 | |||
| H03001 | 流式細胞技術檢測服務 | 詢價 | 1周 | |||
| H04001 | 細胞周期檢測服務 | 詢價 | 1周 | |||
| H04002 | 細胞凋亡檢測服務 | 詢價 | 1周 | |||
| H04003 | 細胞活性測定服務 | 詢價 | 2周 | |||
| H04004 | 細胞基質黏附實驗服務 | 詢價 | 1-2周 | |||
| H04005 | 細胞侵襲實驗服務 | 詢價 | 1-2周 | |||
| H04006 | 細胞免疫熒光實驗 | 詢價 | 1-2周 | |||
| H04007 | 細胞免疫吸附實驗 | 詢價 | 1-2周 | |||
細胞基質黏附實驗服務：CKK-8法進行檢測。客戶需提供：檢測細胞及其培養條件和處理方法。選擇觀察時間點。檢測包括3-5組細胞，每組3個重復。我們提供的結果包括：1細胞黏附情況照片。2（可選）酶標儀檢測的原始數據與統計分析結果。具體價格敬請來電咨詢。
細胞免疫熒光實驗：利用抗原－抗體特異性結合的原理，用經熒光染料標記的抗體對細胞內的蛋白質進行定性或定量研究的方法。流程：細胞爬片 轉染或藥物處理 固定透化 封閉 一抗孵育 熒光二抗孵育 熒光顯微鏡觀察拍照。客戶需要提供熒光一抗及二抗，具體價格敬請來電咨詢。
酶聯吸附實驗（ELISA)：4步驟幫您輕松檢驗各種蛋白大分子抗原：（1）將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。（2）加受檢標本，保溫反應，去除未結合物質。（3）加酶標抗體，保溫反應。固相免疫標抗體結合。（4）加底物顯色。服務價格：檢測3-5組樣品，每組樣品3個復孔，具體價格敬請來電咨詢。
細胞遷移、侵染實驗服務項目：鋪有Matrigel的特殊濾膜，正常細胞不能自由穿過。在下室中加入趨化劑，上室加有經過處理的重懸腫瘤細胞，具有侵襲能力的腫瘤細胞在趨化劑誘導下開始穿膜運動，并粘附在濾膜下表面。具體價格敬請來電咨詢。
細胞增殖實驗使用CCK-8方法： 據活細胞線粒體內的脫氫酶可將試劑中的有效成分轉變為有顏色的Formazan，并可被酶標儀檢測，間接反應活細胞數量。具體價格敬請來電咨詢。（包括4組細胞，每個樣品3-5個復孔，客戶可以選擇檢測時間點。）
穩定細胞株篩選服務： 1.抗生素篩選濃度確定（致死曲線）：2. 細胞接種：轉染實驗前天接種細胞。轉染時細胞密度達到60%~80%；3. 細胞轉染（脂質體）或侵染（慢病毒）4. 利用質粒抗性篩選穩定干擾細胞株；5. 目的基因干擾效果驗證。 周期2-3個月，提供T25穩篩細胞株一瓶，具體價格敬請來電咨詢。
miRNA靶基因預測雙熒光素酶報告系統：吉瑪采用promega的psicheck2.0載體系統構建靶基因3'UTR系統。該系統可檢測siRNA/miRNA與靶基因的調控關系，報告熒光（hRluc)驗證si/miRNA調控作用，校正熒光（hluc)檢測質粒表達效率。另外客戶還可選擇構建突變UTR系統。具體價格敬請來電咨詢。
熒光素報告載體
a.?構建費用2*基因長度，低于2500元的按照2500元計算；構建野生與突變一對的按照4000元計算。
b.?序列超過3kb，或特殊序列高GC重復序列等特殊詢價周期12-25個工作日。
c.?我們確保將客戶指定序列構建正確（有測序結果證實，對于高GC重復序列可能會有缺失，評估后都會予以說明），如有缺失會免費重復修復一次。由于均為預測性實驗，不保證其符合預期功能。目前我們驗證URT與miRNA結合陽性率大約80%；啟動子工作陽性率的70%。
d.?如需本公司驗證gene 3'UTR和miRNA作用，或啟動子表達驗證。一個靶點一株細胞驗證服務費用6000元（產品收費另計，如果包括產品一起報價費用1萬。周期25-30個工作日）。收到50%預付款啟動實驗，收到全款，提交全部原始數據。保證實驗陽性陰性質控結果。不保證其預測信息符合實驗預期。
項目具體價各和實驗相關事宜請聯系吉瑪公司：rnaisupport@genepharma.com，電話：021-51320195-8009。雙方協商一致后簽訂技術服務合同，我們嚴格按照服務合同開展技術服務。
下單前請務必核對訂購表客戶信息和訂購內容無誤，訂單一經確認，當天即啟動生產。 超過當日17：00后不能修改或者取消，如果需要取消訂單，由此產生的費用，將由客戶承擔。
【取消訂單費用規則】
（1）當日17：00前，免費修改或取消。
（2）當日17：00到次日17：00前，按該項產品金額的50%收取。
（3）次日17：00后，按該項產品金額的100%收取。